氟化钠对成年斑马鱼生殖毒性的研究

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本文主要目的在于研究氟化钠对成年斑马鱼所产生的生殖毒性,为进一步研究氟化物对鱼类(水产类)产生的生殖毒性提供理论依据和经验借鉴。本课题将斑马鱼成鱼作为受试动物,选择氟化钠作为染毒化合物,开展慢性毒理暴露试验。首先通过急性毒理试验确定氟化钠对于斑马鱼成鱼的半数致死浓度,为慢性毒理试验中氟的浓度梯度设置提供必要的依据和科学的参考;然后开始慢性毒理试验,分别在氟化钠暴露后的45 d和90 d进行相应试验分别运用酶联免疫分析(ELISA)、实时荧光定量PCR (QRT-PCR)检测斑马鱼成鱼体内相关基因的表达量变化和激素水平变化,运用普通HE染色技术观察斑马鱼成鱼性腺(精巢、卵巢)的发育情况。结果显示:在雌性成年斑马鱼体内:(1)通过酶联免疫分析(ELISA)检测发现氟化钠暴露会降低雌性斑马鱼体内雌二醇(E2)、卵黄蛋白原(VTG)的含量,而提升睾酮(T)的含量;(2)通过实时荧光定量PCR (QRT-PCR)检测发现雌性成年斑马鱼体内孕酮(Prg)受体相对表达量随氟浓度的增加呈现先降后升的趋势(40 mg/L组表达量降低、80 mg/L组表达量升高)、糖皮质激素受体(GR) mRNA相对表达量随氟浓度的增加呈现先降后升的趋势(40 mg/L组表达量降低、80 mg/L组表达量升高)、雄激素受体(AR)基因的表达量呈现上升趋势、CYP19a基因相对表达量呈现整体下降趋势;(3)通过组织切片普通HE染色发现氟化钠暴露后成年雌性斑马鱼卵巢发育受到了阻滞,卵泡出现了发育不良现象。在雄性成年斑马鱼体内: (1)通过酶联免疫分析(ELISA)检测发现氟化钠暴露会提升雄性斑马鱼体内雌二醇(E2)、卵黄蛋白原(VTG)的含量,而降低睾酮(T)的含量,三者的变化趋势与雌性斑马鱼恰恰相反;(2)通过实时荧光定量PCR(QRT-PCR)检测发现雄性成年斑马鱼体内孕酮(Prg)受体相对表达量随氟浓度的增加呈现先升后降的趋势(40 mg/L组表达量升高、80 mg/L组表达量降低)、糖皮质激素受体(GR) mRNA相对表达量随染毒时间的推延呈现先升后降的趋势(45 d后两处理组表达量升高、90 d后两处理组表达量降低)、雄激素受体(AR)基因的表达量呈现下降趋势、CYP19a基因相对表达量呈现整体上升趋势;(3)通过组织切片普通HE染色发现氟化钠暴露后成年雄性斑马鱼精巢生精能力降低、精巢发育迟缓。试验结果说明氟化钠可以通过影响斑马鱼体内生殖相关基因表达量、激素水平和性腺发育而最终对斑马鱼生殖产生毒性效应。
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