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目的：本实验旨在建立体外分离、培养BMSCs的方法，拟验证在血管内皮生长因子与血小板衍生生长因子联合作用下，BMSCs向软骨细胞转化是否优于单独使用细胞因子。为软骨组织工程提供更多的实验依据,为人工软骨的临床运用打下坚实的理论基础。 方法:采用密度梯度离心法结合贴壁筛选法分离人体股骨干骨髓中的BMSCs，经体外扩增培养、流式细胞仪鉴定细胞表面抗原后,取第4代细胞在单层培养条件下，按空白组、PDGF组、VEGF组,PDGF+VEGF组,采用MTT法测各组BMSCs增殖情况,再进行向软骨方向的诱导培养。在诱导的第28天采用阿利新蓝—HE染色法观察各组细胞形态,用阿利新蓝比色法测GAG含量,用RT-PCR法检测Ⅱ型胶原mRNA量,用western blot法测Ⅱ型胶原表达水平。 结果：采用密度梯度离心法结合贴壁筛选法分离出的细胞符合BMSCs形态特征，流式细胞仪检测结果为:CD34、CD45为阴性,CD44、CD90、CD29为阳性，符合BMSCs表面抗原表达特性。MTT法检测结果示：在24h、48h、72h三个时间段,PDGF组、VEGF组、PDGF+VEGF组的OD值均明显高于空白组,且P<0.05,差异有统计学意义；PDGF组、VEGF组的OD值均明显高于VEGF+PDGF组,P<0.05,差异有统计学意义。诱导至28天时采用阿利新蓝——HE复染色,各组均可见均匀蓝染的细胞外基质,基质中可见明显的软骨陷窝,陷窝内可观察到类软骨结构,空白组的细胞外基质相对其他组蓝染较淡,软骨陷窝数量较其他组少。PDGF+VEGF组的细胞外基质相对其他组蓝染最深,软骨陷窝数量高于其他各组,且胞核清晰、触角明显。PDGF组与VEGF组爬片相比较,未见明显差异。阿尔新蓝法测定培养液中GAG的含量结果为:空白组:55.40±2.31 mg/L, PDGF组:65.81±1.56 mg/L,VEGF组:67.66±1.49 mg/L,VEGF+PDG组:89.33±0.83 mg/L, PDGF组、VEGF组、PDGF+VEGF组的GAG含量均高于空白组,且P<0.05,差异有统计学意义。VEGF+PDGF组的值要高于PDGF组、VEGF组,P<0.05,差异有统计学意义。RT-PCR法检测Ⅱ型胶原mRNA水平显示:PDGF组、VEGF组、PDGF+VEGF组的半定量值均高于空白组,且P<0.05,差异有统计学意义。VEGF+PDGF组的值要高于PDGF组、VEGF组,P<0.05,差异有统计学意义。Western blot法检测Ⅱ型胶原蛋白表达水平显示:PDGF组、VEGF组、PDGF+VEGF组的半定量值均高于空白组,且P<0.05,差异有统计学意义。VEGF+PDGF组的值要高于PDGF组、VEGF组,P<0.05,差异有统计学意义。 结论：密度梯度离心法结合贴壁筛选法分离出的骨髓间充质干细胞纯度较高。经体外扩增后，其数量可满足诱导分化的需要。在体外培养体系中,PDGF、VEGF均可促进BMSCs的增殖,且PDGF与VEGF联合作用时促增殖作用要强于单一使用细胞因子。在诱导BMSCs向软骨细胞分化时，PDGF、VEGF均可增强分化效果，两种因子联合使用时具有协同作用。