目的:(1)使用PLGA支架对人牙龈成纤维细胞(HGFs)进行三维培养,构建HGFs-PLGA力学加载模型。(2)采用i TRAQ标记联合二维液相色谱-串联质谱技术(2D-LC-MS/MS)对三维培养及压应力作用下HGFs标本进行蛋白质组学定量分析,筛选静压力作用下HGFs差异表达蛋白。方法:(1)HGFs原代培养及来源鉴定。(2)用第4代的HGFs,制备细胞密度为1×105个/ml的细胞悬液,在1 cm~2PLGA支架上接种1ml悬液。荧光电镜观察HGFs-PLGA复合培养5天后HGFs生长情况,使用CCK8法进行细胞增殖活性检测。(3)建立HGFs-PLGA支架三维复合培养模型,培养4天。实验组分为A、B、C组,对其施加大小为25g/cm~2的压应力,作用时间分别为24、48、72h;对照组分为A0、B0、C0组,分别培养24、48、72h,与实验组对应,不加力处理。每组设置2个重复组。(4)提取各组HGFs总蛋白,Bradford法测定蛋白浓度。(5)i TRAQ定量蛋白质组学技术分析HGFs中差异表达的蛋白质,根据生物信息学对筛选出的差异蛋白进行深层次分析。结果:(1)成功培养HGFs原代并传代纯化。(2)荧光电镜结果显示,聚焦PLGA支架不同平面时,均有观察到HGFs密集生长。CCK-8检测显示细胞种植在PLGA支架培养3-5天细胞处于对数生长期,5-7天处于平台期,符合细胞生长规律。(3)i TRAQ技术鉴定到总蛋白2449个,定量蛋白2438个。GO分析表明,差异表达的蛋白主要参与代谢和细胞信号传导的生物学过程;在细胞位置中主要附着于细胞器、细胞膜上、细胞外基质、突触等位置;在分子功能中主要参与催化活性、转运、酶活性调节、抗氧化等功能。信号通路富集分析发现,差异表达的蛋白主要参与能量代谢通路以及信号转导通路。以i TRAQ技术研究机械压应力作用下HGFs差异表达蛋白,KEGG富集分析结果显示,处在互作关键节点的蛋白多达20多种,其中有TGF-β、细胞色素P450、谷胱甘肽-S-转移酶、血小板衍生生长因子、Ⅰ型胶原蛋白、基质金属蛋白酶1、MAP激酶p38、IL-6、转录因子p65、转录因子p50、纤维连结蛋白、α2-巨球蛋白、纤溶酶原激活因子抑制因子等。结论:(1)PLGA支架能成功构建HGFs三维培养及力学加载模型。(2)i TRAQ技术筛选出静压力作用下HGFs差异表达蛋白,经分析处在蛋白质相互作用网络的节点上的关键蛋白重要的10个是核因NF-k B p65、p50,MAP激酶P38,TGF-β,基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1),α2巨球蛋白,Ⅰ型胶原蛋白,纤维连结蛋白,IL-6,血小板衍生生长因子受体,血小板反应蛋白-1。