IgA肾病(IgAN)是Berger于1968年首次提出的一种常见的原发性肾小球疾病，又称Berger’病，它是以肾小球系膜区IgA沉积为特征的免疫复合物肾小球肾炎，是引起终末期肾功能衰竭的最常见的原因之一，在中国占原发性肾炎患者的25％～33％。 IgAN在临床表现、病理类型以及疾病发展过程中均具有明显的多样性，因此研究该病的发病机理及其影响因素一直是国内外的重点。但到目前为止IgAN的病因和发病机理仍不完全明了，多数学者认为遗传、感染、免疫反应、炎症介质与IgAN发病相关，因病因不明，所以目前尚无针对该病的特异性治疗。 IgA在肾脏的沉积即是IgAN的病理特征，同时也可能是肾小球损伤过程中的重要环节，但目前关于IgA如何沉积在肾脏并进一步造成肾小球损伤的机理仍不十分清楚。近年研究发现患者的血清IgA与正常人相比具有明显的异质性，这种IgA存在结构和功能的异常，异常的IgA不易被肝脏清除并且更易沉积到系膜区，其中起致病作用的主要是骨髓来源的血清型IgA1。目前已经发现IgA1的异常包括：1)IgA1携带了更多的阴离子；2)IgA1分子铰链区存在唾液酸和/或半乳糖的缺失；3)IgA1易自身聚积并可与其他分子形成各类免疫复合物；4)血清IgA1的λ轻链过表达。IgAN中肾小球系膜区沉积的主要是血清型的聚合IgA1(pIgA1)，但血清中pIgA1含量较低，而单体IgA1(mIgA1)含量较高，在热作用下mIgA1可聚合为热聚合IgA1(aIgA1)。目前部分研究证实pIgA1沉积到系膜区后，可以与肾小球系膜细胞(MC)特异性结合并激活信号转导通路，诱发肾小球系膜细胞增殖、分泌炎症因子和细胞外基质，引起炎症反应和细胞外基质堆积，产生IgAN的病理改变。同时系膜区的pIgA1可能通过替代途径激活补体C3，并生成C5b-9复合物，C5b-9可使MC合成炎症介质及基质蛋白进而损伤肾小球。 近年来随着对肾小球足细胞研究的日益深入，足细胞及其分子改变作为肾小球疾病的起始和核心因素的观点也逐渐被广大学者所接受。新近研究发现IgAN不仅是系膜细胞受累的疾病，而且在疾病的发生发展过程中也存在着足细胞的破坏。足细胞位于肾小球基底膜的外侧，是肾小球中最大的细胞，具有生物合成、维持肾小球毛细血管结构以及参与肾小球选择性滤过等多种功能；另外足细胞也是免疫应答的积极参与者，它具有潜在的对多种免疫系统产物发生反应的能力。足细胞损伤通常表现为细胞形态的改变、细胞融合及细胞数量的减少、裂孔膜分子表达异常和细胞骨架重排等形式。nephrin是足细胞裂孔膜上第一个被确定的蛋白成分，是一种分子量180KD的跨膜糖蛋白，属于免疫球蛋白家族，它可以作为粘附分子参与细胞-细胞或细胞-基质间的相互作用，同时也参与足突的信号传导。nephrin在两个足突间形成拉链样结构，这一结构构成了裂孔膜复合体的重要组成部分，对于维持肾小球滤过膜的完整性至关重要。研究表明部分IgAN患者也存在足细胞nephrin分子的病变，足细胞与nephrin分子本身和蛋白尿的发生发展密切相关，而蛋白尿又是导致肾小球疾病向肾脏纤维化进展的独立危险因素，但目前关于异常的IgA1会不会对足细胞产生影响，是什么原因导致IgAN中nephrin分子发生改变，IgA1对足细胞及系膜细胞增殖的影响有何不同以及在IgAN中系膜细胞与足细胞间存在怎样的cross-talk等问题尚待阐明，目前国内外均未看到此类问题的相关报道。明确了上述问题将有利于临床上寻找特异有效的干预措施，从而力争尽早阻断或逆转IgAN中足细胞的病变，延缓患者向终末期肾功能衰竭发展的进程。 基于上述理论基础，本文设计了本实验，我们拟观察IgAN患者血清aIgA1对体外培养的小鼠足细胞nephrin表达的影响，同时我们将利用aIgA1分别干预足细胞及系膜细胞，并利用MTT法检测干预后两种细胞的增殖情况。 研究目的 观察IgAN患者及正常对照的血清aIgA1对足细胞及系膜细胞增殖的影响，并分别从基因和蛋白水平检测aIgA1对足细胞nephrin分子表达的影响。 材料和方法 (1)分别入组21名患者及健康对照，收集血标本；利用Jacalin-agarose亲和层析联合SephacrylS-200HR分子筛层析法分离获得IgA1，并对其进行鉴定及热聚合。 (2)培养小鼠MPC5足细胞株及MSC-1097系膜细胞株，并利用MTT法观察患者及正常人的血清aIgA1对两种细胞增殖的影响。 (3)用患者及正常人的血清aIgA1干预培养的足细胞，并利用RT-PCR、蛋白印迹法检测足细胞nephrin分子mRNA及蛋白水平的改变。 结果 (1)利用亲和层析联合分子筛层析提取了纯度较高的mIgA1，并对其进行了鉴定及热聚合。 (2)MTT法发现aIgA1可引起足细胞增殖的改变，低浓度的aIgA1抑制足细胞增殖(p=0.033)，高浓度的aIgA1促进足细胞增殖(p=0.010)；患者及正常人的aIgA1对足细胞增殖的影响没有不同(p=0.546)。 (3)MTT法发现患者及正常人的aIgA1均可促进系膜细胞增殖，这种增殖表现为时间依赖性及一定的剂量依赖性(p=0.000)，在高浓度时aIgA1促MC增殖的作用消失了(p=0.000)；在作用相同时间时患者低浓度的aIgA1就可引起系膜细胞增殖；两种aIgA1对MC增殖的影响程度无明显不同(p=0.899)。 (4)患者及正常人的aIgAI干预足细胞后，均可下调nephrinmRNA的表达，这种下调表现为时间依赖性及剂量依赖性，且患者的aIgA1下调nephrinmRNA表达的作用更强(p=0.006)。 结论 (1)aIgA1可以影响足细胞的增殖，患者及正常人的aIgA1在低浓度时抑制足细胞增殖，高浓度时可促进足细胞增殖；两种aIgA1对足细胞增殖的影响无明显不同。 (2)患者及正常人的aIgA1均可刺激系膜细胞增殖，这种增殖表现为时间及一定的剂量依赖性，患者及正常人的aIgA1在高浓度时促MC增殖的作用消失了；两种aIgA1对系膜细胞增殖的影响无明显不同。 (3)正常人及患者的aIgA1干预足细胞后，均可下调nephrinmRNA的表达，且患者的aIgA1下调nephrinmRNA表达的作用更强。 (4)研究结果提示aIgA1可以影响足细胞及系膜细胞增殖，且aIgA1对两种细胞增殖的影响存在不同。足细胞可能会直接对IgA1产生反应，足细胞上可能存在IgA1的受体；IgA1可以影响足细胞nephrin的表达，在疾病过程中IgA1可能是加重足细胞损伤的原因之一。