沙芦草染色体加倍技术及再生体系建立研究

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为提高沙芦草(Agropyron mongolicum Keng)的品质,本研究选用种子和分蘖芽两种材料,采用不同浓度秋水仙素(0.02%,0.05%,0.08%,0.11%,0.14%+1.5%二甲基亚砜)和氟乐灵(1,5,10,15,20μmol·L-1)处理沙芦草种子,同时用浸有不同浓度的秋水仙素(0.025%、0.050%、0.075%、0.100%、0.150%、0.200%)和氟乐灵(50、100、150、200、250、300、350、400、500μmol·L-1)的脱脂棉对分蘖芽做包埋处理,并进行表观形态及染色体数目的鉴定,从而选取最优加倍方案。此外,为加快沙芦草的生长速度,缩短试验进程,本研究对沙芦草再生体系进行了筛选,结果如下:  经处理的沙芦草种子成苗后的变异植株均为二倍体与四倍体的混倍体;形态学及细胞学鉴定结果显示,沙芦草幼苗形态出现不同程度的变异(粗化苗、卷化苗和球状苗),种子的平均发芽率随诱变剂浓度的升高和时间的延长而降低,苗高与根长均低于空白对照,各浓度处理的株高与叶宽随浸泡时间的延长呈先增大后减小的趋势。  经染色体鉴定得出最适加倍处理方案:0.11%秋水仙素+1.5%二甲基亚砜处理20h的染色体数目变异率最大,高达50%,成活率为40%;1μmol·L-l氟乐灵处理30h变异效果最显著,变异率达38.46%,成活率为81.25%。  用不同浓度的秋水仙素和氟乐灵对分蘖芽进行包埋处理,综合成活率、株高及植株恢复培养后的分蘖芽再生能力3项指标,秋水仙素更适宜作为加倍试剂。  通过沙芦草再生体系各阶段的比较,沙芦草种子消毒的最佳组合为:无内外稃沙芦草种子经75%酒精浸泡1min+0.1% HgCl2消毒6min,在零染菌率的基础上发芽率可达85%;诱导愈伤组织的方法为:以茎尖为外植体,1/2MS+1.5mg·L-12,4-D+0.06mg·L-16-BA的培养基培养,出愈率可达70%以上。1/2MS+1.5mg·L-12,4-D的继代培养基可改良愈伤组织质量,使胚性愈伤数量增加;1/2MS+0.5mg·L16-BA+0.5mg·L-1NAA作为分化培养基,分化率仅7.5%,且分化过程中愈伤褐化死亡率过高;加入0.1mg·L-lNAA的生根培养基的培养效果较好,生根率可达100%,生根速度较快,根系发达,有助于后期移栽。
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