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目的:观察右归饮联合干细胞介入治疗早期股骨头缺血性坏死的疗效,探讨该方法在促进再血管化、再骨化方面的作用及机理。为临床上推广使用该方法提供客观的实验依据。 方法:健康雄性成年毕格犬24只,随机分为4组:模型组、右归饮组、干细胞介入组、干细胞介入加右归饮组各6只。采用液氮冷冻法造模,建立毕格犬早期股骨头缺血性坏死模型,同时分离、培养、增殖骨髓基质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,MSCs),传至第三代细胞后予Brdu标记细胞。造模完成后,干细胞介入组及干细胞介入加右归饮组行动脉灌注标记后的MSCs。采用Seldinger法插管,确定股骨头供血动脉后,灌注MSCs1ml(细胞密度:5×106-1×107/ml)。介入术后,右归饮组及干细胞介入加右归饮组每天予以右归饮灌胃100ml。治疗后一个月及二个月分批处死动物。观察股骨头大体、影像学及病理组织学改变,同时观察股骨头供血血管的数量及直径的变化情况,以及 VEGF、Brdu免疫组织化学阳性表达情况和荧光定量 RT-PCR分析VEGFmRNA的表达情况。所有数据采用SPSS13.0统计软件包进行分析处理,采用单因素方差分析。 结果:①一般指标及大体观察:各治疗组较模型组毕格犬跛行有改善,股骨头外形更圆滑,软骨面更完整; ②MRI观察:各治疗组较模型组明显改善,干细胞介入加右归饮组更明显,T1W略低信号,T2W和STIR未见明显信号异常; ③DSA观察:干细胞介入组和干细胞介入加右归饮组治疗后可见供血动脉分支增粗、增多,原阻塞血管再通。治疗后较治疗前的血管数量明显增多、血管直径显著增粗(P<0.01),同一时段比较,干细胞介入加右归饮组较干细胞介入组的血管计数有增多、血管直径有增粗(P<0.05, P<0.01); ④组织病理学及免疫组织化学:各治疗组较模型组的结构有明显改善。干细胞介入加右归饮组较其他各组的VEGF阳性表达率都明显增高(P<0.01),且治疗后二个月较治疗后一个月的VEGF阳性表达率显著增高(P<0.01)。干细胞介入加右归饮组较干细胞介入组的Brdu、成骨细胞、软骨细胞及血管阳性表达都明显增高(P<0.01, P<0.05),干细胞介入加右归饮组治疗后二个月较治疗后一个月的Brdu、成骨细胞、软骨细胞及血管阳性表达都明显增高(P<0.01,P<0.05); ⑤荧光定量RT-PCR:干细胞介入加右归饮组较其他各组表达量增多(P<0.01,P<0.05),各治疗组的VEGF表达都高于模型组(P<0.01),干细胞介入加右归饮组及干细胞介入组治疗后二个月 VEGF的表达都高于治疗后一个月(P<0.01)。 结论:第一,右归饮联合干细胞介入治疗早期股骨头缺血性坏死效果显著,该方法能够促进VEGF的表达增强,能够有效地改善坏死股骨头的血供、促进修复,可以早期有效治疗股骨头坏死,并预防塌陷。第二,液氮冷冻法可以成功的造成早期股骨头缺血性坏死模型。符合股骨头坏死病变的一般规律,且具有良好的重复性,坏死成功率高,造模所需时间短,动物死亡率低等优点。第三,右归饮在体内可以诱导干细胞分化为成骨细胞、血管内皮细胞及软骨细胞,跟踪了干细胞在体内的分化情况。