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在体外受精—胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transfer, IVF-ET)周期中有10%～20%的几率会出现完全的受精失败,其原因可能是由于卵母细胞和精子内在的结构或功能缺陷、精卵结合障碍等而引起,具体到每一个受精失败周期中是不同而又很难确定的。然而预测IVF受精失败亦非常困难,国内外也多有报道认为选择合适的卵子及时补救卵胞浆内单精子注射(intracytoplasmic sperm injection, ICSI)可获得妊娠和分娩。为有效降低周期的取消率,我们尝试行短时IVF结合短时IVF补救ICSI的受精方式。但这两种技术本身是否会影响到胚胎染色体非整倍体情况,尚未见相关报道。目的本研究拟运用二轮荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization, FISH)技术分析常规IVF、短时IVF和短时IVF后行补救ICSI胚胎非整倍体情况,更为科学的评价短时IVF及短时IVF后行补救ICSI的安全性,为临床提供更有力的支持依据。方法选取2009年7月～2010年1月郑州大学第一附属医院生殖医学中心314个IVF-ET周期、465个短时IVF-ET周期和82个短时IVF后补救ICSI周期资料。经患者知情同意后收集同期各组废弃胚胎。采用Tween-20/HCl消化透明带后吹打法获得卵裂球,Tween-20/HCl+甲醇/冰醋酸法裂解固定卵裂球,应用荧光杂交探针LSI13/LSI21和CEPX/Y进行二轮FISH, Imstar荧光分析软件拍摄、记录、存档后进行分析。所有数据采用SPSS11.0统计软件包处理,数据采用百分率表示。计数资料采用x2检验。检验标准取α=0.05,P＜0.05为有显著性差异。结果1.统计分析结果回顾性分析314个IVF-ET周期中4082枚卵母细胞,465个短时IVF-ET周期中6030枚卵母细胞和82个短时IVF后补救ICSI周期中749枚卵母细胞受精情况。短时IVF组总受精率、2PN受精率都不低于常规IVF组,短时IVF组优胚率显著高于常规IVF组；短时后补救ICSI组总受精率85.2%显著高于其他两组(P＜0.05)；短时后补救ICSI组多PN受精率8.0%显著高于常规IVF组(P<0.05)。2.卵裂球固定和杂交情况共收集废弃胚胎152只,固定率(固定卵裂球数/获得卵裂球数)为91.9%(352/383)；出信号率(出信号卵裂球数/固定卵裂球数)为96.0%(338/352)。信号反应143只胚胎染色体情况。3.卵裂球FISH结果短时IVF周期的胚胎中胚胎染色体异常率不高于常规IVF周期的胚胎,短时IVF后补救ICSI组与常规IVF组相比胚胎染色体异常率也无显著增高。各组中2PN胚胎的染色体二体率恒定较高,但也存在非整倍体及嵌合体现象。1PN组的胚胎也表现较高的染色体二体率。而≥3PN组中,染色体非整倍体率为81.0%,显著高于1PN组、2PN组(P＜0.05)。数据中可观察到随年龄增加胚胎的染色体异常率呈增高趋势,2PN胚胎≥35岁组染色体异常率显著高于＜30岁组和30～34岁组(P＜0.05)。按平均获卵数13枚为界分组对比染色体异常率差异无显著性。结论1.短时IVF不降低受精率,不增加胚胎染色体异常几率,是一种安全有效的受精方式。2.短时IVF失败后补救ICSI可及时挽救受精失败,有效减少周期取消率,且不增加正常胚胎的染色体异常风险。3.2PN胚胎是移植的首选对象。但也存在染色体异常几率。可能为体外受精妊娠率低下原因之一。IVF中1PN胚胎染色体具有较高的二体型比率,说明IVF中1PN胚胎很大可能为正常受精。3PN胚胎染色体异常高发,不具有移植价值。4.胚胎染色体异常几率随年龄增高而增高,尤其是≥35岁女性,染色体异常几率明显升高。获卵数目对胚胎染色体异常形成关系不大。