依赖于5’-AMP激活的蛋白激酶(AMPK)是一种苏氨酸/丝氨酸激酶，被称为“细胞能量代谢的主要调节器”。细胞能量代谢失衡，会引起代谢综合征等多种疾病，严重影响人类的健康。作为能量代谢过程中重要的调节酶，AMPK可以作为代谢综合征的治疗靶点。　　 迄今为止，已经发现了AMPK的一些小分子激动剂，如metformin、AICAR、噻唑类化合物等，其中，metformin和噻唑类化合物已经广泛应用于Ⅱ型糖尿病的治疗。然而，现有的药物存在着特异性差，用量大等缺点。寻找高效、低毒和特异性强的AMPK小分子激动剂，已成为新型代谢综合征治疗药物的重要研究方向。　　 本论文首先通过细胞水平实验发现了Gambogic Acid对AMPK的激活作用。结合蛋白质异源表达和体外相互作用实验，表明Gambogic Acid与AMPK具有较强的相互作用。进一步通过蛋白质截短实验，确证Gambogic Acid可能与AMPK-α亚基的催化区域结合。　　 本论文构建了AMPK-α蛋白、AMPK-α392蛋白、AMPK-α312蛋白、AMPK-α200蛋白以及AMPK-γ蛋白的原核表达体系，并通过对培养基、诱导剂浓度、诱导时间等表达条件的摸索，确立了异源表达可溶性AMPK-α蛋白、截短蛋白以及AMPK-γ蛋白的表达条件：表达载体为pET32a(+)，BL21(DE3)表达系统，选择LB或TB培养基，0.1mmol/L IPTG、16℃，165 r/min诱导20h，并通过亲和柱层析的方法获得可溶性的AMPK-α蛋白、AMPK-α392蛋白、AMPK-α312蛋白、AMPK-α200蛋白和AMPK-y蛋白。　　 采用荧光滴定和ForteBio Octet Red系统，对AMPK蛋白、AMPK-y蛋白、AMPK-α蛋白与Gambogic Acid的体外相互作用进行研究，结果表明GambogicAcid与AMPK-α亚基具有较强的结合作用。进一步通过不同长度的AMPK-α亚基与Gambogic Acid结合常数的比较，推断Gambogic Acid可能与AMPK-α200区域结合，从而激活AMPK。　　 我们研究发现的Gambogic Acid与目前已报道的AMPK的小分子激动剂，在化学结构和结合机制上，完全不同。该研究结果为开发高效、低毒和高特异的AMPK小分子激动剂类药物，以AMPK为靶点的药物先导化合物的发现，以及进一步研究AMPK的活化机理奠定了基础。