【摘 要】
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表皮生长因子受体（EGFR）在不同形式的癌症中表达量升高,并且与癌症的恶性程度和预后不良呈正相关。EGFRv III是EGFR的一种活性突变形式,可诱导多种恶性肿瘤的生长,这使其成为研究小分子靶向治疗制剂的热门候选靶标。本试验首先从人前列腺癌细胞系PC-3细胞中提取总RNA,反转录为c DNA,以c DNA为模板扩增EGFRv III胞内外区基因,并连接p Ad Track-CMV质粒载体,转化含
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表皮生长因子受体（EGFR）在不同形式的癌症中表达量升高,并且与癌症的恶性程度和预后不良呈正相关。EGFRv III是EGFR的一种活性突变形式,可诱导多种恶性肿瘤的生长,这使其成为研究小分子靶向治疗制剂的热门候选靶标。本试验首先从人前列腺癌细胞系PC-3细胞中提取总RNA,反转录为c DNA,以c DNA为模板扩增EGFRv III胞内外区基因,并连接p Ad Track-CMV质粒载体,转化含有p Ad Easy-1的大肠杆菌BJ5183感受态细胞,获得同源重组质粒。同时以p Ad Track-CMV空质粒载体转化有p Ad Easy-1的大肠杆菌BJ5183感受态细胞作为阴性对照。重组质粒转染HEK293A细胞,得到表达EGFRv III胞内外区蛋白的重组腺病毒。将重组腺病毒分为高剂量组和低剂量组免疫小鼠,二免两周后采血,采用ELISA方法检测血清中Ig G抗体水平。结果表明:（1）、成功构建表达EGFR胞内外区重组腺病毒质粒,扩增重组腺病毒后通过PCR和Western-blot鉴定表明EGFRv III胞内外区基因在HEK293A细胞中能正常表达。（2）、通过测定重组腺病毒的TCID50计算得到胞内区重组腺病毒滴度为1.7×1011PFU/m L,胞外区重组腺病毒滴度为1×1010PFU/m L,CMV重组腺病毒滴度为1×1011PFU/m L。（3）、重组腺病毒免疫小鼠后,小鼠血清中Ig G抗体水平胞内组1:800,胞外组1:1600。采用ELISA试剂盒测定小鼠血清样品中IFN-a和IL-2的含量,结果显示,免疫后小鼠血清内IFN-a及Th1型细胞因子IL-2含量明显高于对照组,P＜0.01,具有显著的统计学意义。研究表明,本试验成功构建了表达EGFRv III胞内外区基因的重组腺病毒,且该重组腺病毒能诱导小鼠产生特异性的体液免疫反应。
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