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第一部分盘状结构域受体1在卵巢癌组织中的表达及临床意义目的探讨人卵巢癌组织中盘状结构域受体1(DDR1)蛋白的表达情况及其临床意义。方法运用免疫组化法检测33例正常卵巢组织、43例卵巢良性肿瘤组织及94例卵巢癌组织中的DDR1蛋白表达情况,比较不同临床病理特征卵巢癌病人的DDR1蛋白阳性表达率,分析DDR1蛋白阳性表达与卵巢癌病人病理特征及预后的关系。结果卵巢癌组织的阳性表达率[55.32%(52/94)]均高于正常卵巢组织[0(0/33)]、卵巢良性肿瘤组织[11.63%(5/43)](均P<0.05),而正常卵巢组织与良性卵巢肿瘤组织的阳性表达率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。FIGOⅢ~Ⅳ期、低分化、有腹腔转移病人的DDR1蛋白的表达阳性率[60.98%(50/82)、62.16%(46/74)、66.67%(42/63)]分别高于FIGOⅠ~Ⅱ期、中-高分化者、无腹腔转移的病人的阳性表达率[16.67%(2/12)、30%(6/20)、32.26(10/31)](均P<0.05)。卵巢癌组织中DDR1蛋白的阳性表达及腹腔转移是卵巢癌患者死亡的危险因素(P>0.05)。结论DDR1蛋白在卵巢癌组织中呈高表达,其可能参与了卵巢癌的发生发展与远处转移,或可成为评估患者预后的重要因素。第二部分外源性Collagen I诱导下TM4SF1对高转移性卵巢癌细胞HO8910PM生物学行为影响的体外研究目的研究外源性Collagen I诱导下TM4SF1对高转移性卵巢癌细胞H O8910PM的体外生物学行为的影响。方法慢病毒转染RNAi抑制TM4SF1在HO8910PM的表达,RT-PCR以及Western Blot技术检测RNAi后细胞中TM4SF1基因蛋白的表达情况。细胞免疫荧光方法检测在有无外源性Collagen I的存在下TM4SF1与DDR1在HO8910PM中的定位,Transwell迁移和侵袭实验检测细胞迁移与侵袭能力的改变。结果成功构建了靶向沉默TM4SF1并同时表达GFP荧光的慢病毒载体,感染并筛选出稳定表达细胞株LV-TM4SF1-RNAi-GFP-HO8910PM以及阴性对照LV-CON-TM4SF1-GFP-HO8910PM。RT-PCR实验表明TM4SF1基因在m RNA水平沉默效率约为65%,Western Blot检测TM4SF1蛋白沉默效率约为70%。免疫荧光结果显示TM4SF1及DDR1均为细胞膜蛋白,当有外源性Collagen I存在时,TM4SF1可使DDR1在细胞膜上聚集,同时伴随TM4SF1聚集。Transwell迁移实验表明:LV-RNAi-TM4SF1-GFP-H O8910PM组细胞穿过Transwell小室的细胞数为94.667±9.018,较HO8910PM组(257.667±17.898)及LV-CON-TM4SF1-GFP-HO8910PM组(261.667±29.023)明显下降(P<0.05);LV-RNAi-TM4SF1-GFP-HO8910PM在有50μg/ml Collagen I存在的条件下,细胞穿过Transwell小室的细胞数为150.667±7.371,与HO8910PM+50μg/ml Collagen I组(370.000±16.523)及LV-CON-TM4SF1-GFP-HO8910PM+50μg/ml Collagen I组(377.333±15.948)相比较明显下降(均P<0.05)。当有外源性Collagen I存在时,HO8910PM、LV-RNAi-TM4SF1-GFP-HO8910PM、LV-CON-TM4SF1-GFP-HO8910PM细胞穿过Transwell小室的细胞数均较无外源性Collagen I存在时明显增加(均P<0.05)。Transwell侵袭实验表明:LV-RNAi-TM4SF1-GFP-HO8910PM组细胞穿过铺设Matrigel的Transwell小室的细胞数为57.00±5.568,较HO8910PM组(134.333±6.658)及LV-CON-TM4SF1-GFP-HO8910PM组(141.333±7.638)明显下降(均P<0.05),LV-RNAi-TM4SF1-GFP-HO8910PM在有外源性Collagen I存在的条件下,细胞穿过铺设Matrigel的Tr answell小室的细胞数为109.000±4.359,与HO8910PM+50μg/ml Collagen I组(216.333±16.921)及LV-CON-TM4SF1-GFP-HO8910PM+50μg/ml Co llagen I组(226.667±4.509)相比较明显下降(均P<0.05)。当有外源性C ollagen I存在时,HO8910PM、LV-RNAi-TM4SF1-GFP-HO8910PM、LV-C ON-TM4SF1-GFP-HO8910PM细胞穿过铺设Matrigel的Transwell小室的细胞数均较无外源性Collagen I存在时明显增加(均P<0.05)。结论TM4SF1与DDR1均为细胞膜蛋白,TM4SF1可以在外源性Collagen I存在的条件下使DDR1在细胞膜上聚集,同时伴随TM4SF1聚集。下调TM4SF1的表达可以抑制卵巢癌HO8910PM细胞的迁移以及侵袭能力。外源性Collagen I的存在可以促进卵巢癌HO8910PM细胞的迁移以及侵袭。第三部分外源性Collagen I诱导下DDR1对高转移性卵巢癌细胞HO8910PM生物学行为影响的体外研究目的研究外源性Collagen I诱导下DDR1对高转移性卵巢癌细胞HO8910PM的体外生物学行为的影响。方法慢病毒转染RNAi抑制DDR1在HO8910PM的表达,RT-PCR以及Western Blot检测干扰效率,Transwell迁移和侵袭实验检测细胞迁移与侵袭能力的改变。结果RT-PCR与Western结果显示,LV-DDR1-RNAi-mcherry-2沉默D DR1效果最佳,RT-PCR实验表明DDR1基因在m RNA水平沉默效率约为85%,Western Blot检测DDR1蛋白沉默效率约为95%。用其感染并筛选出稳定转染细胞株LV-DDR1-RNAi-mcherry-HO8910PM以及阴性对照LV-CO N-DDR1-mcherry-HO8910PM。Transwell迁移实验表明:LV-RNAi-DDR1-mcherry-HO8910PM组细胞穿过Transwell小室的细胞数为99.000±5.292,较HO8910PM组(160.333±6.028)及LV-CON-DDR1-mcherry-HO8910PM组(161.000±4.583)明显下降(均P<0.05),LV-DDR1-RNAi-mcherry-HO8910PM在有50μg/ml Collagen I存在的条件下,细胞穿过Transwell小室的细胞数为150.667±5.508,与HO8910PM+50μg/ml Collagen I组(239.000±10.583)及LV-CON-DDR1-mcherry-HO8910PM+50μg/ml Collagen I组(237.667±8.386)相比较明显下降(均P<0.05)。Transwell侵袭实验结果显示:LV-RNAi-DDR1-mcherry-HO8910PM组细胞穿过铺设Matrigel的Tra nswell小室的细胞数为66.000±6.557,较HO8910PM组(126.667±6.506)及LV-CON-DDR1-mcherry-HO8910PM组(133.667±7.572)明显下降(均P<0.05)LV-RNAi-DDR1-mcherry-HO8910PM在有50μg/ml Collagen I存在的条件下,穿过铺设Matrigel的Transwell小室的细胞数为117.000±7.211,与HO8910PM+50μg/ml Collagen I组(180.000±2.646)及LV-CON-DDR1-mcherry-HO8910PM+50μg/ml Collagen I组(190.000±9.849)相比较明显下降(均P<0.05)。当有外源性Collagen I存在时,HO8910PM、LV-RNAi-DDR1-mcherry-HO8910PM、LV-CON-DDR1-mcherry-HO8910PM细胞穿过铺设Matrigel的Transwell小室的细胞数均较无外源性Collagen I存在时明显增加(均P<0.05)。结论下调DDR1的表达可以抑制卵巢癌HO8910PM细胞的迁移以及侵袭能力。外源性Collagen I的存在可以促进卵巢癌HO8910PM细胞的迁移以及侵袭。