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目的食物过敏发病率逐年升高,卵清白蛋白（OVA）是鸡蛋中主要过敏原。免疫佐剂霍乱毒素B（CTB）和变应原结合能增强诱导变应原耐受,本研究将CTB与OVA融合表达于枯草芽孢表面,建立OVA食物过敏小鼠模型,研究口服重组B.s-Cot C-CTB-OVA枯草芽孢预防OVA食物过敏的作用及机制。为变应原疫苗研制提供新的思路,为食物过敏的免疫治疗提供新的途径。方法重组枯草芽孢的构建:合成与PCR扩增OVA基因,克隆入p ET28a-CTB质粒,以其为模板,PCR扩增CTB-OVA基因,克隆入p US186-Cot C枯草杆菌质粒中,转化枯草芽孢杆菌WB600,测序验证重组质粒的构建。DSM营养耗竭法诱导芽孢生产。SDS-PAGE和Western blot鉴定重组CTB-OVA蛋白在枯草芽孢的表达。口服重组芽孢预防OVA食物过敏:BALB/c小鼠随机分为5组:Na（?）ve组、食物过敏Model组、B.s-Cot C芽孢组、B.s-Cot C-CTB芽孢组、B.s-Cot C-CTB-OVA芽孢组。在建立OVA食物过敏模型前4周,连续4周灌胃109枯草芽孢,每周3次。第-1天收集小鼠粪便以进行OVA-s Ig A检测、16Sr DNA测序分析和粪菌移植实验。第0天和第14天除Na（?）ve组小鼠外,使用50μg和1mg铝剂对小鼠进行致敏。第18、20、22、24天隔天使用50mg OVA对小鼠加强致敏。第28天使用100mg OVA对小鼠进行激发,评估小鼠腹泻情况及其它过敏症状,采集小鼠血清进行免疫球蛋白（IgE、IgG1、IgG2a）检测、分离小鼠脾细胞进行Treg细胞、肥大细胞、嗜酸性粒细胞检测与脾细胞培养上清细胞因子检测。重组芽孢治疗小鼠粪菌移植的研究:在OVA食物过敏模型建立前（第-1天）,收集口服B.s-Cot C和B.s-Cot C-CTB-OVA芽孢的小鼠粪便制备粪菌移植（FMT）混悬液。BALB/c小鼠随机分为4组:Na（?）ve组、食物过敏Model组,B.s-Cot C FMT组、B.s-Cot C-CTB-OVA FMT组。进行粪菌移植前对B.s-Cot C FMT组、B.s-Cot C-CTB-OVA FMT组进行抗生素处理。连续7天对小鼠灌注自身重量1/500的粪菌量,随后进行OVA食物过敏模型建立,评估小鼠食物过敏症状与腹泻情况,检测小鼠血清Ig E。结果测序结果显示CTB-OVA成功导入p US-186-Cot C质粒开放阅读框中。SDS-PAGE和WB结果显示重组B.s-Cot C-CTB-OVA芽孢在42.9Kda附近可见有清晰重组蛋白条带表达,表明B.s-Cot C-CTB-OVA重组枯草芽孢成功构建。口服重组B.s-Cot C-CTB-OVA芽孢组,与其它组相比,能显著升高粪便OVA-s Ig A（p<0.05）。100mg OVA激发后,口服重组B.s-Cot C-CTB-OVA芽孢,与食物过敏Model组相比,能减缓小鼠食物过敏症状（p<0.05）、腹泻症状（p<0.05）和腹泻率（p<0.05）。ELISA与流式细胞术结果显示B.s-Cot C-CTB-OVA组和B.s-Cot C-CTB组中OVA-Ig E、Ig E+plasma、OVA-Ig G2与和Model组和B.S-Cot C组相比显著降低（p<0.01）。此外B.s-Cot C-CTB-OVA组与Model组相比,OVA-Ig G1和OVA-Ig G2a显著降低（p<0.05）。细胞因子结果显示B.s-Cot C-CTB-OVA与B.s-Cot C-CTB组和B.S-Cot C与Model组相比小鼠脾细胞IL-4显著下调（p<0.05）,脾脏IL-10显著升高（p<0.05）。与Model组、B.s-Cot C组和B.s-Cot C-CTB组相比,口服B.s-Cot C-CTB-OVA芽孢能抑制小鼠脾脏c-kit+Ig E+肥大细胞（p<0.001）和CD11b+Singlec F+嗜酸性粒细胞（p<0.01）。B.s-Cot C-CTB-OVA和B.s-Cot C-CTB组与Model组相比,脾细胞Treg数量明显增加（p<0.05）,其中B.s-Cot C-CTB-OVA结果更加显著（p<0.05）。小鼠肠道粪便16sr DNA结果显示,B.s-Cot C、B.s-Cot C-CTB、B.s-Cot C-CTB-OVA芽孢能调节肠道菌群的组成。口服B.s-Cot C-CTB-OVA芽孢在phylum水平可上调Bacteroidia丰度和下调Firmicutes和Epsilonbacteraeota的丰度。在family水平上能上调Lactobacillaceae和Muribaculaceae丰度。在Genus水平上能上调Odoribacter的丰度。FMT结果显示:经过B.s-Cot C-CTB-OVA FMT和B.s-Cot C FMT的小鼠过敏症状和腹泻症状改善不明显。但B.s-Cot C-CTB-OVA FMT的小鼠能显著降低小鼠外周血OVA-Ig E（p<0.05）。提示B.s-Cot C-CTB-OVA引起的肠道菌群改变对于OVA食物过敏的抑制起到一定的作用。结论口服重组B.s-Cot C-CTB和B.s-Cot C-CTB-OVA枯草芽孢能减缓小鼠OVA食物过敏与腹泻症状、降低小鼠血清OVA-Ig E,升高Treg。此外,B.s-Cot C-CTB-OVA枯草芽孢能有效诱导黏膜免疫s Ig A的产生和抑制肥大细胞与嗜酸性粒细胞的数量。同时B.s-Cot C-CTB-OVA能改善肠道微生态的组成,上调Lactobacillaceae和Muribaculaceae丰度。且重组CTB-OVA治疗小鼠粪菌移植能抑制受体小鼠OVA-Ig E。总之,口服重组CTB-OVA枯草芽孢可抑制小鼠OVA食物过敏,机制与其诱导的肠道微生态改变相关。