本文旨在建立从鮟鱇鱼皮中提取、纯化硫酸皮肤素(DS)的方法,并对其结构和抗凝血活性进行研究。为鮟鱇鱼皮的利用与硫酸皮肤素的开发提供理论依据。 鮟鱇鱼皮硫酸皮肤素的提取采用酶解法,通过正交试验法和响应面分析法对提取参数进行优化,得到最佳提取工艺如下：鮟鱇鱼皮原料加入2.5％的复合酶(木瓜蛋白酶：胰酶=1:2,W/W),按液料比26:1(V/W)加入蒸馏水,76℃下提取19小时,3倍体积乙醇沉淀,冷冻干燥后得到粗品。 采用三氯乙酸(TCA)法、Sevag法和CPC法对提取所得DS进行纯化,结果显示Sevag法和CPC法纯化效果均较好,三氯乙酸法纯化效果较差。Sevag法操作简便,比CPC法更具优越性。经液相色谱法和醋酸纤维薄膜电泳法双重鉴定表明纯化后的DS为单一组分,纯度为99.15％。 通过化学法对鮟鱇鱼皮DS的基本组成进行分析,结果表明DS中氨基己糖含量为35.75±1.70％,己糖醛酸含量为29.02±2.90％,硫酸基含量为18.83±0.60％,硫酸基与羧酸基的比值为1.02±0.14:1。与来源于猪皮、鸡皮和牛蛙皮的DS相比,鮟鱇鱼皮DS中硫酸基含量最高且它在组成上有别于其它来源的DS。根据高效凝胶渗透色谱(HPGPC)、气相色谱(GC)、毛细管液相色谱(CLC)、质谱(MS)、红外光谱(IR)的分析结果,结合其他理化性质,对鮟鱇鱼皮DS的化学结构进行了初步确认。鮟鱇鱼皮DS的分子量为1.59×109,其结构中存在木糖、半乳糖、葡萄糖醛酸、艾杜糖醛酸和N-乙酰氨基半乳糖五种单糖,摩尔比为0.07:0.04:0.07：1.12:1.19,其中木糖与半乳糖是存在于糖链与核心蛋白连接区的少量单糖。鮟鱇鱼皮DS可被硫酸软骨素ABC酶酶解,37℃反应4小时可完全酶解,其糖链是以艾杜糖醛酸-[1→3]-N-乙酰氨基半乳糖-4硫酸(△Di-4S(Ido))为主要二糖重复单位构成的,此外还含有少量的艾杜糖醛酸-[1→3]-N-乙酰氨基半乳糖-6硫酸(△Di-6S(Ido))和葡萄糖醛酸-[1→3]-N-乙酰氨基半乳糖(△Di-OS)二糖单位。△Di-OS、△Di-4S(Ido)与△Di-6S(Ido)三种不饱和二糖的摩尔比为0.01:1.71:0.01。鮟鱇鱼皮DS具有糖胺聚糖的特征红外吸收,其单糖环型为吡喃型。 鮟鱇鱼皮DS的体外抗凝血活性实验以肝素为对照,研究了不同剂量DS对凝血时间(CT)和血浆凝血酶原时间(PT)的影响。结果表明,DS对凝血时间(CT)的影响较大,对血浆凝血酶原时间(PT)无显著性影响,说明其凝血机制主要是作用于内源性凝血途径。而肝素对CT和PT的影响均较显著,抗凝效果大于DS。在1-10 mg/mL的剂量范围内随着剂量的升高,DS的抗凝效果增强。DS的抗凝血效果虽然低于肝素,但由于其出血副作用较小,因此具有很大的应用潜力。