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单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogens, LM)是一种重要的食源性致病菌,世界卫生组织(WHO)将其列入重点检测的四大食源性致病菌之一。LM能引起人类和动物李斯特氏菌病。人和动物感染LM可引起单核细胞增多症、脑膜炎、败血症和流产,严重威胁人类健康和社会经济的发展,同时也造成巨大经济损失。因此,加强食品中LM检测工作,建立一种快速、简便的筛查方法具有重要的意义。本研究旨在建立一种简便的、特异性强的针对食品中LM的胶体金免疫试纸条检测方法。本研究分别用0.3%福尔马林灭活的LM菌体和超声波破碎的菌体碎片免疫日本大耳白兔制备多克隆抗体。获得的多克隆抗体效价均达300000,与金黄色葡萄球菌、阪崎肠杆菌、福氏志贺氏菌有交叉反应。多克隆抗体用辛酸-硫酸铵法和磁珠吸附法纯化后纯度明显提高。以酸溶碱沉法提取的LM鞭毛蛋白作为免疫原免疫Balb/c小鼠制备单克隆抗体。通过问接ELISA方法对Balb/c小鼠脾脏细胞和SP2/0骨髓瘤细胞的融合细胞培养上清进行检测,筛选到6株阳性融合细胞。但6株阳性融合细胞经过第一次亚克隆后转为阴性,最终没有筛选到能够稳定分泌单克隆抗体的融合细胞株。本研究用两株可配对的抗LM单克隆抗体,建立了特异性检测LM的胶体金免疫层析方法。抗LM单克隆抗体标记胶体金颗粒,醋酸纤维素膜上分别包被另一株抗LM单克隆抗体和驴抗鼠二抗作为检测线和控制线,组装成胶体金免疫层析试纸条。最终确定的生产工艺参数为：胶体金颗粒粒径为40 nm左右,抗LM单克隆抗体A标记量为20μg/(mL胶体金溶液),标记时pH值为8.1,检测线上抗LM单克隆抗体B浓度为2.0 mg/mL,控制线上驴抗鼠二抗浓度为1.0 mg/mL。在此工艺条件下,对LM纯培养物的检测灵敏度为107CFU/mL。对Ⅰ和4b血清型的LM均可检测,与同属的绵羊李斯特氏菌及属外的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、阪崎肠杆菌等菌无交叉反应。在实际食品样本添加LM,经李氏菌增菌液选择性增菌48 h后试纸条检测结果为阳性,并用OXA平板涂布计数验证结果正确。通过37℃加速保存实验,试纸条保质期可达15个月。本研究成功地研制出特异性检测LM胶体金免疫层析试纸条,该试纸条具有结果容易判定、特异性强、稳定性好、操作简单的优点,可满足基层单位大批量检测。