甘薯解偶联蛋白(UCP)基因家族鉴定及其对CO2胁迫的响应机制

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采后甘薯在贮藏过程中因呼吸所产生的二氧化碳(Carbon dioxide,CO2)积聚而常常发生高CO2伤害,造成严重的经济损失。解偶联蛋白(Uncoupling protein,UCP)参与调控植物对多种生物、非生物胁迫的应激响应,但未见UCPs调控采后甘薯对CO2胁迫的响应机制研究。本研究首先在甘薯全基因数据库中筛选甘薯UCP基因家族成员并进行克隆和生物信息学分析,研究其应答非生物胁迫的响应模式;采用0%±1%CO2(CK)、15%~20%CO2(MCD)、55%~60%CO2(HCD)对甘薯进行胁迫处理,通过生理学及荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,qRT-PCR)技术,分析了不同CO2浓度胁迫下采后甘薯IbUCPs基因表达水平、酚类代谢、活性氧代谢以及呼吸代谢等变化规律以及相互关系;基于转录组学探究了采后甘薯在CO2胁迫下的差异代谢通路以及与UCP基因之间的关系,结果如下:1、从甘薯基因库鉴定了5个甘薯UCPs基因家族成员,分别命名为IbUCP1-5,IbUCPs的理论等电点为8.53~9.86,含有261~375个的氨基酸残基,其二级结构主要包括α-螺旋和无规则卷曲;IbUCPs家族成员均有3个相同的保守结构域。IbUCPs基因家族成员的表达具有组织特异性,其中IbUCP4在茎中表达水平最高,其余IbUCPs均在块根中表达最高。IbUCPs基因家族对高盐胁迫均有响应,而IbUCP1、IbUCP4和IbUCP5对低温和干旱胁迫有强烈响应,表明IbUCPs基因家族成员对不同的非生物胁迫呈现差异性表达。2、采后甘薯在高CO2胁迫(HCD)下,IbUCPs基因家族的表达水平与对照(CK)组存在显著差异;HCD处理引起甘薯的褐变度、相对电导率和丙二醛含量显著增加,过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)和超氧化物歧化酶(SOD)酶活性升高,超氧阴离子(O2·-)和过氧化氢(H2O2)含量上升;同时,增强了线粒体总呼吸速率Vt和交替呼吸速率VAOX,降低了细胞色素呼吸速率VCyt,HCD处理甘薯的乙醇含量显著高于对照。在10 d贮藏期里,15%~20%(MCD)CO2处理的甘薯与CK组之间无差异。以上研究结果表明解偶联蛋白参与了采后甘薯对CO2胁迫的抗氧化应激反应。3、转录组学分析表明,高CO2胁迫引起采后甘薯的差异代谢通路主要涉及蔗糖代谢(INV、SUS)、糖酵解(HK、PFK、PK)、氧化磷酸化(COX、ND)以及乙醇代谢(PDC、ADH)等,其关键基因均上调表达,推测IbUCPs可能参与调控高CO2胁迫引起的乙醇积累和呼吸代谢变化。
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