限食和重喂食条件下中缅树鼩(Tupaia belangeri)白色脂肪组织的研究

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在自然界中,动物所需的食物资源会随生境的变化而发生一定的改变,与此同时,不同种类的动物具有一系列的生存机制以适应复杂多变的环境,其中小型哺乳动物在应对食物资源短缺时也具有相对应的适应策略。白色脂肪组织(White adipose tissue,WAT)作为主要的能量储存器官,是动物在面临食物资源短缺条件下的重要能量来源。WAT内线粒体活性较低,线粒体内膜的解耦联蛋白基本不能发生解偶连作用,但冷驯化和激素可刺激WAT褐化,增加解偶联蛋白-1(Ucoupling protein-1,UCP1)表达量。目前,关于低温诱导小型哺乳动物白色脂肪组织产热的研究的报道很多,而关于限食是如何影响小型哺乳动物白色脂肪组织产热变化的研究较少。本论文在之前的研究基础上,以中缅树鼩(Tupaia belangeri)为研究对象,继续从个体、组织和分子水平等方面来探究在限食及重喂食条件下中缅树鼩的生理指标和WAT产热的变化情况,为中缅树鼩具有多变的能量稳态机制以适应野外食物资源提供了重要依据,同时也为小型哺乳动物生理生态的适应机制奠定了一定的理论基础。本论文主要从以下四个部分来系统的展开研究:1、限食和重喂食条件下中缅树鼩基础指标的研究限食及重喂食条件下,中缅树鼩体重、摄食量、静止代谢率(Resting metabolic rate,RMR)、脂肪含量、肺湿重以及消化道中的小肠、盲肠和胃的湿重均会发生表型可塑性。限食28天期间,结果发现中缅树鼩的体重、摄食量和RMR与对照组相显著下降,重喂食28天期后恢复至对照组水平。限食28天,中缅树鼩的心、肝、肾及大肠无显著变化,而消化道中的小肠、盲肠和胃湿重显著上调,重喂食28天后均恢复至对照组水平。结果表明中缅树鼩可通过调节基础指标以适应食物资源多变的自然环境。2、限食及重喂食后中缅树鼩腹股沟脂肪组织PET/CT扫描及形态学研究腹股沟脂肪组织正电子发射计算机断层显像(Positron emission computed/tom-ography technique,PET/CT)扫描:通过对限食及重喂食后的中缅树鼩腹股沟脂肪组织的PET/CT扫描来探究其在食物资源短缺条件下的生理代谢活性。结果显示:食物限制28天后会导致中缅树鼩的腹股沟WAT吸收18氟-氟化脱氧葡萄糖(18F-fluorodeoglucose,18F-FDG)的平均辐射值(Standerdized uptake value,SUV)相比对照组值显著下降,动物重喂食28天后平均辐射值却恢复至对照组水平。表明中缅树鼩会降低其生理代谢活性以应对食物资源短缺问题进而维持机体稳态平衡。(2)腹股沟脂肪组织形态学研究:腹股沟脂肪组织主要为白色脂肪组织,利用苏木素-伊红染色切片(Hematoxylin-eosin staining,HE)观察其形态变化情况。结果显示:限食28天后的脂肪组织与对照组相比形态明显缩小,但颜色变化不显著,并且没有发现多腔室小脂滴的脂肪细胞。重喂食28天后其形态大小和颜色均恢复至对照组水平。表明中缅树鼩在食物给予的能量不足时会消耗脂肪组织,且消耗过程中可能仅均匀消耗每个脂肪细胞中的一部分,而细胞数量保持不变。3、中缅树鼩在限食和重喂食后腹股沟脂肪组织的流式细胞分析利用UCP1抗体和米色脂肪细胞特异性抗体标记腹股沟脂肪细胞,探究限食对中缅树鼩白色脂肪组织褐化的影响。结果显示:实验室驯化28天后,腹股沟脂肪组织中UCP1和CD137的阳性表达分别为30.14%和14.45%,食物限制28天后表达量分别下降至13.01%和4.35%,重喂食28天后UCP1和CD137的阳性表达分别为28.57%和15.8%,出现了一定的恢复现象(P>0.05)。表明中缅树鼩可通过减弱白色脂肪组织褐化以降低限食条件下的能量消耗。4、限食和重喂食后PRDM16、BMP7、COX-2、PPARα和PGC-1α基因的变化利用qRT-PCR技术分析与白色脂肪组织褐变相关的5个调控基因PR结构域蛋白16(PR domain protein 16,PRDM16)、骨形态发生蛋白7(Bone morphogenetic protein 7,BMP7)、环氧合酶-2(Cyclooxygenase,COX-2)、过氧化物酶体增殖激活受体α(Peroxisome proliferator-activated receptorα,PPARα)和过氧化物酶体增殖物受体γ共激活因子1α(Peroxisome proliferator-activated receptor gcoactivator 1α,PGC-1α)在限食和重喂食期间的相对表达量。结果显示:与对照组相比,限食28天后的COX-2和BMP7基因的相对表达量显著下降(P<0.05),而PRDM16、PPARα和PGC-1α基因的相对表达量无显著变化(P>0.05)。重喂食28天后,COX-2和BMP7基因的相对表达量增加至对照组水平(P>0.05)。结果表明限食可能抑制了中缅树鼩WAT的产热活性,减少不必要的能量产热消耗。综上所述,限食可降低中缅树鼩体重、摄食量和RMR,促使肺、小肠、盲肠和胃的湿重上升,同时降低腹股沟脂肪组织中UCP1和CD137的阳性表达以及COX-2和BMP7的相对表达量,从而抑制中缅树鼩WAT发生褐变。重喂食后以上指标均恢复至对照组水平。本研究证实了在限食及重喂食条件下中缅树鼩的生理指标具有表型可塑性,并且限食可降低中缅树鼩WAT的产热活性,为探究中缅树鼩适应食物资源短缺时的能量稳态机制提供了一定的生理依据。
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