【摘 要】
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铜藻（Sargassum horneri）是一种大型的潮间带海藻,主要含有多糖、多酚、岩藻黄质、三萜、黄酮等,广泛应用于食品、医药等领域。本文对提取的铜藻多糖进行分离纯化,并对铜藻多糖硫酸酯SHP进行活性评价。建立动物模型研究铜藻多糖硫酸酯SHP的抗氧化和免疫活性,进一步建立体外细胞模型研究铜藻多糖硫酸酯SHP的抗氧化和免疫活性及其机制,实验分为以下四部分。（1）以铜藻为原材料,水提醇沉法提取铜藻
【基金项目】
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“蓝色粮仓科技创新”国家重点研发计划课题（2020YFD0900901）；
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铜藻（Sargassum horneri）是一种大型的潮间带海藻,主要含有多糖、多酚、岩藻黄质、三萜、黄酮等,广泛应用于食品、医药等领域。本文对提取的铜藻多糖进行分离纯化,并对铜藻多糖硫酸酯SHP进行活性评价。建立动物模型研究铜藻多糖硫酸酯SHP的抗氧化和免疫活性,进一步建立体外细胞模型研究铜藻多糖硫酸酯SHP的抗氧化和免疫活性及其机制,实验分为以下四部分。（1）以铜藻为原材料,水提醇沉法提取铜藻多糖硫酸酯SHP。用Sepharose Fast Flow离子交换填料和Sephacryl S-200 HR凝胶进行分离纯化,得到多糖组分SHPS-0。通过HPGPC、傅里叶红外光谱仪、离子色谱仪对SHPS-0进行检测。HPGPC检测发现SHPS-0是分子量相对均一的多糖,SHPs-0的分子量为1287 k Da。理化性质分析表明SHPS-0的总糖含量为74.1%,蛋白质含量3.2%,硫酸根含量18.7%。离子色谱法测定单糖组成,SHPS-0由岩藻糖、氨基葡萄糖、半乳糖、木糖和甘露糖构成,摩尔比为0.8:0.024:0.114:0.03:0032。（2）SHP对环磷酰胺诱导的免疫抑制小鼠的保护作用。选用ICR小鼠进行动物实验,分为Con组、Cy组（环磷酰胺诱导免疫抑制模型）、Cy+SHP组（免疫抑制+铜藻多糖硫酸酯）、SHP组（铜藻多糖硫酸酯）。实验结果显示,SHP可以显著提高免疫抑制小鼠的日均增重、胸腺和脾脏指数。HE染色结果表明SHP可以恢复免疫抑制小鼠回肠形态。ELISA Kit结果表明SHP提高了免疫抑制小鼠血清中GSH-Px、SOD、IL-2和IL-10水平,显著降低了免疫抑制小鼠血清中DAO和LPS水平。16S rDNA测序结果表明SHP提高了免疫抑制小鼠肠道菌群的丰富度和多样性,下调免疫抑制小鼠的Firmicutes/Bacteroidetes值,使F/B值接近正常组。实验结果提示SHP可以提高免疫抑制小鼠脏器指数和免疫能力,降低氧化应激和肠道通透性,调节免疫抑制小鼠肠道菌群失衡,恢复肠道微生态,进而减缓环磷酰胺诱导的小鼠肠道损伤。（3）SHPs-0对H2O2诱导的RAW264.7巨噬细胞氧化损伤的保护作用。用0.3 mmol/L H2O2处理RAW264.7巨噬细胞12 h建立氧化损伤模型。通过MTT法证明SHPs-0对RAW264.7巨噬细胞无毒性作用后,通过ELISA Kit和反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测氧化损伤细胞的抗氧化水平。结果表明SHPs-0可以显著提高了抗氧化酶GSP-Px和SOD的水平,显著降低了MDA和LDH含量,显著提高了抗氧化相关基因（GPX1、SOD1、HO1和NQO1）m RNA的表达。实验结果提示SHPs-0可以缓解H2O2诱导的RAW264.7巨噬细胞氧化损伤。（4）SHPs-0对RAW264.7巨噬细胞的免疫调节作用。ELISA检测结果表明SHPs-0显著提高了细胞因子IL-6、IL-10和TNF-α的分泌。RT-PCR结果表明SHPs-0显著提高了IL-6、IL-10和TNF-αm RNA表达水平。Western blot结果表明SHPS-0组显著提高了p-p65、p-IκBα蛋白表达水平、P-p65/p65和P-IκBα/IκBα的比值。实验结果揭示SHPs-0可以通过调节NF-κB信号通路,提高IL-6、IL-10和TNF-αm RNA的表达水平,促进IL-6、IL-10和TNF-α的分泌来提高免疫功能。
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