研究背景颅咽管瘤是儿童鞍区最常见的原发性脑肿瘤,尽管在组织学上属于良性肿瘤（WHO（40）级）,然而其侵袭性的生长方式,以及特殊的生长部位（毗邻视交叉、垂体柄、丘脑等）,使得患儿尽管在手术后保持着较高的长期存活率,但常常伴随着严重神经内分泌异常的并发症,导致较差的预后和较低的生活质量。在其现有的两种病理组织学类型——造釉细胞型和鳞状乳头型中,前者多见于儿童,瘤体常呈囊性或囊实性,术中可见肿瘤同周围组织黏连严重,术后复发率高。近年来,随着肿瘤微环境概念被不断强调,关于炎症与肿瘤发病之间关系的相关研究成为关注领域。炎症反应可以通过众多炎症因子、趋化因子的释放以及炎症免疫细胞的参与,导致组织细胞内信号通路的过度活化或者异常信号通路的激活,从而促进肿瘤的生成,增殖侵袭,乃至于转移与复发。而同时肿瘤组织又能通过其自身具有的旁分泌特点,募集多种免疫细胞,表达相应受体,重构其所处的微环境,产生免疫逃逸反应。同其他颅内良性肿瘤相比,造釉细胞型颅咽管瘤内部存在剧烈的炎症反应一直被认为是其明显的特征,近年来国内外研究者证实了该肿瘤内部各类炎性介质的存在。如同儿童最常见的低级别胶质瘤-毛细胞星形细胞瘤相比,其包括IL-6、IL-10、IL-1R,以及多种趋化因子都明显上升。而这些炎症细胞及细胞因子在颅咽管瘤的产生,发展和演化过程中的作用,迄今未被阐明;因此,探究炎症反应在这些过程中的确切性的作用以及背后的机制,尝试寻找有效的干预手段来可控地调节疾病进展的方向,对临床诊治具有重要意义。故本课题想要尝试寻找造釉细胞型颅咽管瘤（Adamantimous Craniopharyngioma,ACP）内部炎症反应与临床的相关性以及其中的关键分子,并探究相关分子在炎症及免疫反应中的意义。第一部分造釉细胞型颅咽管瘤中炎症反应与临床预后相关性分析目的:探究造釉细胞型颅咽管瘤中炎症细胞浸润情况,以及炎症反应,手术方式及其他临床特征的相关性。方法:本研究共纳入西京医院收治造釉细胞型颅咽管瘤患者61例,通过院内OA平台及微缩病案管理系统,回顾性收集患者手术入路、切除程度、手术时间、术后并发症及其他相关临床信息,并通过电话或门诊随访,了解对应患者预后情况;并经伦理委员会审查通过,从标本库中收集造釉细胞型颅咽管瘤患者肿瘤病理组织切片,采用免疫荧光与免疫组织化学染色检测巨噬细胞极化情况;采用炎症细胞计数评分法,对采用HE染色进行肿瘤组织炎症等级评分;使用SPSS24.0做相关统计学分析,使用卡方检验或Fisher确切概率检验,初步评价手术方式、切除程度,以及炎症反应等级之间的组间差异,及与患者预后的相关性,并绘制Kaplan-Meier生存曲线或使用Cox分析进行单因素生存分析,探讨各指标与患者预后的关系,初步分析炎症反应及小胶质/巨噬细胞浸润特征与肿瘤进展的关系。结果:手术切除程度:61例中全部切除36例,次全切除25例(残留部分即与重要结构粘连,不易分离的肿瘤或囊壁。使用Fisher确切概率检验,全切组和次全切组在癫痫等多种术后并发症发病率之间均无统计学差异（P＞0.05）;2例患者住院期间因严重下丘脑反应死亡,其余59例患者在对症治疗及其他专科治疗后康复出院,住院时间0-41天,中位时间12天。至随访截止（2020年12月1日）,术后生存的59例患者中,肿瘤发生复发18例,复发时间6-70（中位时间24）个月,随访时间1-120（中位时间21）个月。复发率与性别（P=0.515）、手术入路（P=0.381）等之间无统计学差异。Kaplan-Meier分析计算无进展生存期（progress free survival,PFS）,秩对数检验（Log Rank Test）结果显示,肿瘤切除程度同患者术后无进展生存期PFS之间无统计学差异（P=0.693）。所收集到25例造釉细胞型颅咽管瘤患者的肿瘤组织切片中,低级3例,中级12例,高级10例,卡方检验表明不同炎症等级间的手术切除程度无显著差异（P=0.276）,而同肿瘤进展之间呈高度相关（P＜0.001）,同时生存分析结果显示高炎症等级组预后明显差于中低等级组（P=0.022）。HE染色,免疫组织化学及免疫荧光比较,同一患者,初、复发肿瘤组织内部炎症细胞浸润程度不同,且巨噬细胞激活程度增加,而极化程度有所减弱。结论:临床上不同手术方式的选择多是基于肿瘤部位,肿瘤大小等多种因素综合决定的。在最大程度保证患者生存质量的前提下,术中选择次全切方式不会影响患者的预后;肿瘤内部的炎症反应可能是肿瘤不良预后的特征,同时在初发肿瘤中,包括巨噬细胞在内的各类炎症细胞浸润明显的肿瘤,更具有复发倾向,同一患者初复发肿瘤相比,炎症细胞浸润增加。第二部分造釉细胞型颅咽管瘤炎症反应中的关键效应分子探讨目的:筛选颅咽管瘤炎症反应中的关键分子,探讨其表达情况,并通过外部数据库探究其临床价值及可能参与的分子机制。方法:从GEO数据库获得造釉细胞型颅咽管瘤转录表达谱数据GSE94349,运用免疫浸润算法CIBERSORTx分析,评价和比较同一脑肿瘤组织测序序列内,不同肿瘤组织中包括巨噬细胞在内的各类免疫细胞浸润情况;通过Network Analyst行差异基因分析,并通过GSEA功能聚类算法筛选参与炎症反应的可能关键分子SERPINs;并运用包括TIMER,Oncomine,GEPIA,TISCH,TCGA等多个在线数据库,初步评价SERPINs在脑肿瘤中的表达及预后价值,以及上下游分子间的可能相互作用;通过荧光原位杂交实验,验证筛选SERPINs在造釉细胞型颅咽管瘤中同巨噬细胞的表达定位情况;最后通过培养原代ACP细胞,探究ACP小胶质细胞相互作用后,所筛选分子在小胶质细胞内部的表达改变情况。结果:使用CIBERSORTx比较造釉细胞型颅咽管瘤,毛细胞性星形细胞瘤以及正常脑组织内免疫细胞浸润情况,结果可见M0、M2巨噬细胞,静息态CD4+T细胞在肿瘤内部浸润比例明显增高,而M1型巨噬细胞数量则显著降低;通过Network Analyst内置Limma包分析差异基因,行GO/KEGG分析,另结合GSEA聚类分析,比较多个Hallmark基因,发现SERPINE1等在内的SERPINs基因为关键通路Hub基因;利用TCGA数据库及其他外部在线分析数据库,初步分析SERPINE1在脑肿瘤的表达及预后情况,发现SERPINE1（P＜0.01,HR=1.7）、SERPING1（P＜0.05,HR=1.7）及SERPINB2（P＜0.05,HR=1.6）在同胶质母细胞瘤无病生存期相关,高表达组预后低于低表达组,肿瘤微环境单细胞转录组学数据库TISCH结果提示SERPINE1及SERPING1多富集于单核/巨噬细胞群及恶性细胞群。荧光原位杂交实验显示了在造釉细胞型颅咽管瘤内部SERPINE1及SERPING1同巨噬细胞的共表达证据,后续进行原代培养,行肿瘤-胶质细胞共培养,Western Blot实验检测发现共培养后,BV2及HMC3小胶质细胞中SERPINE1表达量均有不同程度上升。结论:造釉细胞型颅咽管瘤内部炎症细胞浸润明显,而浸润的炎症及免疫细胞多处于抑制或免疫静息状态,提示肿瘤内部存在明显的免疫抑制特征;对差异基因的富集,以及结合多项炎症经典通路的GSEA结果提示,SERPINs基因家族可能是参与炎症反应的关键效应分子。同时,通过利用多个外部数据库进行泛癌水平,及脑胶质瘤数据集中,探讨了效应分子的表达及预后价值;最后在颅咽管瘤组织中观察到了相似的表达改变,提示候选基因,尤其是SERPINE1,可能是介导肿瘤细胞同肿瘤相关巨噬细胞交互作用中的关键角色,并同肿瘤的复发行为相关。