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目的:老年痴呆,包括老年性痴呆(又称阿尔茨海默病,AD)和血管性痴呆(VD),目前全世界大约有2900万患者。VD在我国患病率65岁以上为2%,占全部老年痴呆的35.8~39%,是仅次于AD的第二大痴呆病因。患者会出现记忆力、认知能力、情绪与行为改变等一系列的症状与体征,持续数月或半年以上,对患者及其家人的生活质量造成严重影响。
血管性痴呆在中医属于“呆症”、“痴呆”、“健忘”等疾病的范畴,病位在脑,与心和肾的关系密切。心血虚、肾精虚、心肾不交是血管性痴呆发生的三大主因。本实验从补心、补肾、交通心肾、心肾同补四个治疗角度入手,选择补益心血的代表方天王补心汤、补益肾精的代表方六味地黄汤、交通心肾的师传自拟方既济汤(在交泰丸的基础上加减而成)、心肾同补选择天王补心汤六味地黄汤同用作为研究对象,通过治疗效果的比较分析,找出治疗血管性痴呆的最佳方药,指导临床用药。
方法:实验分为正常组、假手术组(进行手术,但不进行脑缺血再灌注)、模型组(脑缺血再灌注)、脑复康组、六味地黄汤组、天王补心汤组、既济汤组、六味地黄汤天王补心汤合用组,各组通过学习记忆实验,测定脑内相关酶(SOD、MDA、NO)及病理学实验,观察六味地黄汤、天王补心汤、既济汤、六味地黄汤天王补心汤合用对小鼠学习记忆的影响,探讨其影响机制。结果表明,在各项研究中,假手术组与正常对照组相比无统计学差异(P>0.05),说明手术过程对小鼠各项指标无影响。
实验结果如下:
1、六味地黄汤、天王补心汤、既济汤、六昧地黄汤天王补心汤合用对小鼠学习记忆的影响
通过神经行为学的避暗实验、跳台实验、探索实验,观察六味地黄汤、天王补心汤、既济汤、六味地黄汤天王补心汤合用对小鼠学习记忆的影响。
结果显示:在避暗试验中,与假手术组相比,脑缺血再灌注后小鼠避暗实验表现为进入暗室的潜伏期显著缩短、错误次数显著增加。与模型组相比,脑复康组、六味地黄汤组、天王补心汤组、既济汤组、六味地黄汤天王补心汤合用组小鼠避暗实验表现为进入暗室的潜伏期显著延长、错误次数显著减少。与脑复康组相比,六味地黄汤组、天王补心汤组、既济汤组小鼠进入暗室的错误次数显著减少。
在探索实验中,与假手术组相比,脑缺血再灌注后小鼠探索试验中到达暗室时间、到达高端时间、到达明室时间(后面的明室)均明显延长,小鼠爬高端的次数明显减少,在暗室滞留时间和在明室滞留时间有明显差异。与模型组相比,脑复康组、六味地黄汤组、天王补心汤组、既济汤组、六昧地黄汤天王补心汤合用组小鼠探索试验中到达暗室时间、到达高端时间、到达明室时间(后面的明室)均明显缩短,小鼠爬高端的次数明显增加,在暗室滞留时间和在明室滞留时间无明显差异。与脑复康组相比,六味地黄汤组、天王补心汤组、六味地黄汤天王补心汤合用组小鼠到达暗室时间明显缩短;六味地黄汤组、天王补心汤组、既济汤组、六味地黄汤天王补心汤合用组小鼠到达高端时间、到达明室时间(后面的明室)均明显缩短;六味地黄汤组、天王补心汤组小鼠爬高端的次数明显增加。
在跳台实验中,与假手术组相比,脑缺血再灌注后小鼠从平台跳下的潜伏期显著缩短,犯错误次数显著增多。与模型组相比,脑复康组、六味地黄汤组、天王补心汤组、既济汤组、六味地黄汤天王补心汤合用组小鼠从平台跳下的潜伏期显著延长,犯错误次数显著减少。与脑复康组相比,六味地黄汤组、天王补心汤组小鼠从平台跳下的潜伏期显著延长;六味地黄汤组、天王补心汤组、既济汤组、六味地黄汤天王补心汤合用组小鼠犯错误次数显著减少。
上述结果表明,脑复康、六味地黄汤、天王补心汤、既济汤、六味地黄汤天王补心汤合用对小鼠被动回避学习记忆有改善作用,六味地黄汤、天王补心汤、既济汤、六味地黄汤天王补心汤合用对小鼠被动回避学习记乙的改善作用综合优于脑复康。其中,天王补心汤对小鼠被动回避学习记忆的改善作用最明显。
2、六味地黄汤、天王补心汤、既济汤、六味地黄汤天王补心汤合用对小鼠脑中SOD、MDA、NO的含量的影响
按照试剂盒上酶学的试验方法,研究六味地黄汤、天王补心汤、既济汤、六味地黄汤天王补心汤合用对脑缺血再灌注小鼠脑内SOD、MDA、NO的含量的影响。
结果显示,与假手术组相比,脑缺血再灌注后小鼠脑中SOD、NO的含量均显著降低,MDA含量显著增高。与模型组相比,脑复康组、六味地黄汤组、天王补心汤组、既济汤组、六味地黄汤天王补心汤合用组小鼠脑中SOD、NO的含量均显著增高,MDA含量显著降低。与脑复康组相比,六味地黄汤组、天王补心汤组小鼠脑中SOD、NO的含量均显著增高,MDA含量显著降低;既济汤组小鼠脑中NO的含量显著增高,MDA含量显著降低;六味地黄汤天王补心汤合用组小鼠脑中SOD含量显著增高,MDA含量显著降低。其中,天王补心汤组小鼠脑中SOD、NO的含量增高最明显,MDA含量降低最明显。
结果表明,脑复康、六味地黄汤、天王补心汤、既济汤、六味地黄汤天王补心汤合用可提高小鼠脑组织SOD和NO活性,降低MDA含量,清除自由基,阻碍生物膜的过氧化反应,从而产生抗衰老作用。其抗衰老机制可能与提高抗氧化酶的活性、清除自由基有关。其中,以天王补心汤的作用最明显。
3、六味地黄汤、天王补心汤、既济汤、六味地黄汤天王补心汤合用对小鼠脑组织海马区神经元的影响
通过对小鼠脑组织病理形态学的观测,分析六味地黄汤、天王补心汤、既济汤、六昧地黄汤天王补心汤合用对小鼠海马区神经元形态的影响。
病理形态学显示:空白对照组和假手术组神经细胞排列紧密,层次分明,细胞结构清楚,细胞核及胞质清晰,尼氏体形态正常。脑缺血再灌注后小鼠海马区神经细胞损伤、胶质细胞增生、血管壁增厚。脑复康组、六味地黄汤组、天王补心汤组、既济汤组、六味地黄汤天王补心汤合用组小鼠大部分海马锥体细胞不同程度恢复,排列改善,尼氏体形态改善。其中,天王补心汤组小鼠海马锥体细胞仅有少量脱失,细胞核仁清晰可见,胞浆正常,尼氏体大部分形态正常。
结果表明:脑复康、六味地黄汤、天王补心汤、既济汤、六味地黄汤天王补心汤合用对血管性痴呆损伤的脑神经元能起到不同程度的恢复作用。其中,以天王补心汤对小鼠脑神经元的恢复作用最明显。
结论:
1、脑缺血再灌注能够造成小鼠的血管性痴呆,本实验造模成功。脑复康对脑缺血再灌注导致的小鼠血管性痴呆有治疗作用,与文献报道一致。
2、天王补心汤、六味地黄汤、既济汤、天王补心汤六味地黄汤合用对脑缺血再灌注导致的小鼠血管性痴呆有治疗作用,且综合评价优于脑复康。
3、天王补心汤对脑缺血再灌注导致的小鼠血管性痴呆治疗作用最好,综合评价优于六味地黄汤、既济汤、天王补心汤六味地黄汤合用。