离子液体基质和超声喷雾基质沉积方法用于MALDI-MS成像分析

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基质辅助激光解析电离质谱(matrix-assisted laser desorption ionization-mass spectrometry,MALDI-MS)成像技术近年来引起广泛关注并得到快速发展,该技术在分子水平上对生物组织切片进行多组分“直接”分析,经过图像重建软件获得组织中目标成分的分布,提供可视化的组织样品中组分分布的定位、定性和定量信息。其中基质的选择和覆盖方法对于该技术的应用至关重要。本论文使用傅里叶变换离子回旋共振质谱(FT-ICR-MS)仪器,从基质和基质覆盖方法两方面,研究改进MALDI-MS成像中遇到的基质分布不均匀及定量重复性差等问题。(1)采用离子液体基质2,5-二羟基苯甲酸丁胺,改进MALDI-MS分析寡糖的定量重复性,并用于大豆和豆叶中寡糖的质谱成像研究。实验中采用将离子液体2,5-二羟基苯甲酸丁胺甲醇溶液(20%,v/v)直接覆盖样品的简单加基质方法,使用正离子检测模式,考察寡糖样品分析的MALDI-MS定量重复性,并用于大豆和豆叶寡糖成分的MALDI-MS成像。结果显示,MALDI-MS使用离子液体2,5-二羟基苯甲酸丁胺基质可以显著改善定量重复性,分析蔗糖、棉子糖、水苏糖三种寡糖样品的点内重复性RSD<3%,点间重复性RSD<4%,在线性0.062-1.00 mg/mL线性相关系数r~2≥0.996,显示出较好的定量分析潜力。将该基质用于MALDI-MS成像分析大豆切片和豆叶表面的二糖、三糖和四糖,得到空间分辨率为150μm的三种寡糖质谱成像图。三种寡糖在大豆中大致均匀分布,在豆叶中的分布均以叶尖为多。根据标准曲线和图中的信号强度可以估计其大致含量。显示离子液体2,5-二羟基苯甲酸丁胺作为基质可较好用于不同样品中寡糖的MALDI-MS成像分析。(2)采用简单的超声喷雾基质沉积方法,获得微米尺寸的细小结晶并用于MALDI-MS成像分析。实验中使用基质的乙醇溶液,通过在比较了不同的基质后,选择2-[(2E)-3-(4-叔丁基苯基)-2-甲基丙-2-烯基]丙二腈(DCTB)。优化实验条件,采用该超声喷雾装置在玉米切片表面沉积DCTB基质,MALDI-MS在正离子模式下成像分析玉米切片组织。结果在玉米切片中能够同时获得不少于16种成分的MALDI-MS成像,包括甘油三酯(TAGs)和磷脂酰胆碱(PC)。显示超声喷雾可以较好用于晶体基质的覆盖,结晶细小均匀,MALDI-MS定量重复性较好,可用于MALDI-MS成像。
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