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目的:芹菜素是干预动脉粥样硬化发展的候选天然化合物,其干预作用与调控疾病发展的两个因素高血脂症及炎症相关,但其分子作用机制尚未明确。因此,本论文拟通过LPS所致的Raw264.7细胞炎症模型,急性高脂血症模型和高脂饮食诱导的ApoE-/-动脉粥样硬化模型,从调控脂质代谢及炎症的角度探讨芹菜素干预动脉粥样硬化发展的分子机理。方法:1.芹菜素对LPS所致Raw264.7细胞炎症反应的影响:Raw264.7细胞根据不同检测要求设计实验,用LPS(500ng/mL)刺激致炎症反应,采用cck8试剂盒检测不同浓度芹菜素的细胞活性;ROS及线粒体自噬试剂盒检测ROS的分泌和线粒体自噬活性,ELISA试剂盒检测ROS下游炎症因子的分泌。2.芹菜素干预急性高脂血症的作用机制研究:实验一将60只C57BL/6小鼠随机分为六组,分别为正常组、模型组、非诺贝特组(26mg/kg)、芹菜素高剂量组(25mg/kg)、芹菜素中剂量组(12.5mg/kg)和芹菜素低剂量组(6.25mg/kg),用triton WR-1339(0.12g/mL)对小鼠进行肌肉注射,致急性高脂血症模型。采用生化仪检测血脂相关指标;RT-PCR技术检测小鼠肝脏自噬和脂代谢相关基因mRNA及自噬相关microRNA的表达;显微镜观察肝脏病理变化;激光共聚焦观察LC3B/ADRP和UVRAG/ADRP的共定位;电子显微镜观察自噬小体的形成。实验二将60只C57BL/6小鼠随机分为6组,分别为正常组,模型组,非诺贝特组(26mg/kg)、芹菜素组(25mg/kg),抑制剂组(LY294002,1.5mg/kg)和芹菜素+抑制剂组,用triton WR-1339(0.12g/mL)对小鼠进行肌肉注射,致急性高脂血症模型。采用生化仪检测血脂相关指标;RT-PCR技术检测自噬相关基因mRNA的表达。3.芹菜素干预动脉粥样硬化发展的作用机制研究:将10只雌雄各半的C57BL/6小鼠作为空白对照组,25只雄性和25只雌性ApoE-/-小鼠随机分成五组,分别为模型组、瑞舒伐他汀组、芹菜素高剂量组(25mg/kg)、芹菜素中剂量组(12.5mg/kg)和芹菜素低剂量组(6.25mg/kg),高脂饲料喂养致动脉粥样硬化模型。采用生化仪检测血脂相关指标;RT-PCR技术和Western Blot技术检测小鼠肝脏自噬及脂代谢相关基因mRNA及蛋白的表达;显微镜观察肝脏病理变化;油红o试剂对小鼠胸主动脉及心脏进行染色。结果:1.在LPS所致小鼠巨噬细胞Raw264.7炎症反应实验中发现,芹菜素的给药浓度在1pμM左右时对细胞活性无影响;芹菜素明显减少LPS所致的ROS的产生同时增强线粒体自噬活性同时明显减少ROS下游炎症因子IL-6的分泌。2.在triton WR-1339所致C57BL/6小鼠急性高脂血症实验中,芹菜素明显降低小鼠血脂水平,改善肝功能;芹菜素增加小鼠肝脏中TC、TG的含量;芹菜素上调肝脏自噬相关基因及脂质代谢相关基因的表达,同时下调对自噬负性调控的microRNA的表达;通过激光共聚焦观察发现,芹菜素增加LC3B/ADRP和UVRAG/ADRP的共定位,电镜观察发现,芹菜素增加自噬小体的形成;在PI3K抑制剂LY294002的干预下发现,芹菜素不能降低小鼠血脂水平,同时不能上调自噬相关基因的mRNA表达。3.在高脂饲料喂养致ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化实验中,由油红0实验可知,芹菜素明显减少小鼠胸主动脉及心脏斑块的形成,芹菜素明显降低动脉粥样硬化小鼠的血脂水平,减少肝脏中TC、TG含量,且减轻肝脏病变程度,改善肝功能;芹菜素上调自噬相关基因的表达,增加自噬和脂代谢相关蛋白的蛋白表达量。结论:本课题通过对芹菜素的抗炎、降脂及干预AS发展的作用研究,初步阐明了芹菜素干预动脉粥样硬化发展的药效与芹菜素调控巨噬细胞线粒体自噬(mitophagy)以抑制炎症因子的分泌及调控自噬依赖的脂代谢—脂噬(lipophagy)有相关性,为芹菜素日后防治抗动脉粥样硬化的药物研究提供新思路及药理实验依据。