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目的利用GeXP多重基因表达遗传分析系统,建立一种能够同时检测脑炎相关的8种虫媒病毒的多重逆转录-聚合酶链反应(mRT-PCR)方法,并对此方法作出初步评价。方法以脑炎相关的8种虫媒病毒为研究对象,包括版纳病毒(Banna virus,BAV),乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV),蜱传脑炎病毒(Tick-borne encephalitis virus,TBEV), Tahyna病毒(Tahyna virus,TAHV),辽宁病毒(Liaoning virus,LNV),科萨努尔森林病病毒(Kyasanur forest disease virus,KFDV),辛德毕斯病毒(Sindbis virus,SINV)及云南环状病毒(Yunnan orbivirus,YUOV)并加入小鼠脑脊髓炎病毒(Theiler’s Mouse Encephalomyelitis virus, TMEV)做为内部对照。利用GeXP系统建立多重RT-PCR检测方法,设计各病毒特异引物并进行筛选,以病毒分离培养物和阳性标本来验证引物及多重反应体系的特异性,根据PCR结果来优化多重反应体系及反应条件,构建单克隆质粒并进行体外转录并制备标准品即体外转录RNA的梯度稀释液来检测多重体系的灵敏度。用该方法对未知标本进行检测,并将检测结果与其它方法进行比较,根据比较的结果对该方法做出评价。结果筛选后的各病毒引物扩增片段大小与设计相符且特异性强,相互之间无交叉反应。优化后的多重检测体系,可扩增出各病毒对应的特异片段,可在102拷贝/μL水平同时并特异地检测出8种(共13个特异片段)脑炎相关虫媒病毒RNA。通过对37份蚊虫碾磨液提取核酸的标本检测,可看出GeXP多重检测方法特异性强,且灵敏度明显高于病毒分离及半巢式PCR。结论成功建立了一种基于GeXP的多重RT-PCR技术平台的8种脑炎相关虫媒病毒的检测新方法,该方法具有高通量、灵敏度高、特异性强且快速等优点,对病毒性脑炎的分子诊断及流行病学调查具有重要意义。