胰岛素瘤定性诊断及IGF2在其发病中的作用研究

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研究目的:探索延长口服葡萄糖耐量试验(5h-OGTT)对胰岛素瘤定性诊断的临床价值,寻找简便易行的诊断指标。胰岛素样生长因子2(IGF2)是一种促进肿瘤细胞增殖的因子,不仅能够促进肿瘤细胞的分裂分化,而且还能抑制肿瘤细胞的凋亡,在肿瘤的发生、发展中起着至关重要的作用,IGF2差异甲基化区域(DMR)2高甲基化导致IGF2的高表达,与胰岛素瘤的发生密切相关。因此,基础研究主要探讨IGF2在胰岛素瘤发病机制中的作用。研究对象与方法:首先研究明确诊断为“胰岛素瘤”患者15人、“反应性低血糖”患者12人。随后,进一步扩大样本至75例以“低血糖症”收入我院的患者进行验证最佳诊断界值。基础研究通过RT-PCR、免疫组化染色、免疫荧光等技术检测IGF2表达及定位。用CCK8、EdU、Western blotting等技术检测细胞增殖。结果:1.ROC曲线分析结果提示胰岛素/血糖比值300min与C肽/血糖比值0 min联合对胰岛素瘤的诊断价值最大,曲线下面积(AUC)为0.94,其敏感度达到100.0%,特异度83.3%,阳性预测值88.2%,阴性预测值100.0%,阳性似然比6.0,阴性似然比0.0。其最佳诊断界值分别为20.45 pmol/mmol、0.19 nmol/mmol;2.扩大样本验证上述的最佳诊断界值对胰岛素瘤的诊断价值的分析提示胰岛素/血糖比值300min与C肽/血糖比值0 min联合对胰岛素瘤的诊断具有较高的特异度(73.08%vs.55.77%),该模型相应的敏感度、阴性预测值、阳性预测值、阴性似然比、阳性似然比分别为82.67%、90.48%、57.58%、0.24、3.07;3.IGF2在人胰岛素瘤瘤体中高表达,以及在Min6及INS1细胞中均有表达,免疫荧光显示胰岛素瘤瘤体正常胰岛结构丧失,IGF2主要定位于细胞质中;4.过表达IGF2后,CCK8、EdU及PCNA结果提示IGF2可以促进细胞增殖;5.过表达IGF2后棕榈酸(PA)处理24h,Western blotting结果显示Bax表达较对照组减少,而Bcl-2的表达升高,且Bcl-2/Bax比值增加(all P<0.05),提示过表达IGF2可能在一定程度上改善PA诱导的细胞凋亡。结论:1.5h-OGTT试验中胰岛素/血糖比值300min与C肽/血糖比值0 min联合对胰岛素瘤的临床定性诊断具有重要的价值。2.IGF2在胰岛素瘤中高表达,可能通过促进细胞增殖导致胰岛素瘤的发生。
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