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轮叶党参(Codonopsis lanceolata Benth.et.Hook.f)为桔梗科党参属多年生藤本植物,广泛分布我国、韩国、日本和欧洲地区。轮叶党参具有较高的营养价值和药用价值,其中皂苷类和多糖为主要活性成分。目前对轮叶党参皂苷研究较多,而对轮叶党参多糖的分离纯化、理化性质、结构分析和活性系统性研究报道相对较少。本文以吉林省长白山地区轮叶党参根为原料,对轮叶党参根多糖的提取、分离纯化、理化性质、结构、体外抗氧化性和抑制黑色素瘤转移机制进行系统研究,旨在为我国轮叶党参资源的综合开发利用提供新的方向和参考依据,主要研究内容如下:(1)利用超声波结合纤维素酶法优化轮叶党参多糖提取工艺。酶解温度为45℃,加酶量为0.7%,pH值为4.5,酶解时间为3 h,轮叶党参多糖得率为10.18%。在最优酶解条件下,利用超声波提取筛选出最佳工艺为超声功率147 W,超声时间为15 min,超声温度为36℃,在此条件下轮叶党参多糖得率为11.77%。(2)对Sevag法、三氯醋酸法、三氟三氯乙烷法、酶法与Sevag结合四种方法对脱蛋白质效果进行了对比分析,结果表明脱蛋白最佳方法为酶与Sevag结合法。利用0.20%木瓜蛋白酶,pH6,65℃酶解3 h,再用Sevag法处理四次,蛋白质脱除率为92.01%,多糖保留率为97.66%。轮叶党参多糖脱蛋白后用DEAE-52纤维素离子柱层析得到三种主要组分CLPS1、CLPS2和CLPS3,三种组分所占的比例分别为CLPS148.30%、CLPS2 40.50%和 CLPS3 8.15%。经 Sephadex S-300 葡聚糖凝胶柱层析的洗脱CLPS1、CLPS2、CLPS3保留率分别为94.12%,92.31%和90.50%。曲线得单一洗脱峰,并且峰形对称,纯度较高,证明其为均一组分。(3)通过研究轮叶党参各组分多糖的体外抗氧化能力表明,各组分轮叶党参多糖均具有抗氧化能力,并且CLPS1抗氧化效果尤为明显。对CLPS1理化性质研究表明,CLPS1溶解性受温度和pH影响较大,在弱碱环境下溶解性大,最适溶解温度为80℃,NaCl对CLPS1溶解性影响较小。CLPS1浓度增大粘度随之增大,CLPS1溶液温度升高多糖粘性下降,剪切速率增加和剪切时间延长多糖粘性均降低。CLPS1多糖分子呈聚集态,分子直径大约为80～180nm,支链短且呈交叉状。(4)CLPS1比旋光度[a]D20=+44 °;总糖含量为97.6%,糖醛酸为13.18%;单糖组成分别是阿拉伯糖;半乳糖;葡萄糖;半乳糖醛酸;甘露糖。其摩尔比为2.7:3.4:2.3:1.1:0.5。经波谱和化学法分析研究表明,CLPS1中存在葡萄糖醛酸,分子中含有吡喃糖并且a-和β-构型同时存在。主链主要由阿拉伯糖和半乳糖组成;半乳糖和葡萄糖形成支链和主链的末端残基;确定分子质量为91.7 kDa,Gal分支点糖残基是葡萄糖(1→4,6),半乳糖(1→3,6);半乳糖有五种键型:1→、1 →3、1 →4、1→6、1 →3,6;葡萄糖有三种键型:1→、1→4、1→4,6;阿拉伯糖有一种键型1→5,半乳糖醛酸存在1→3键型。(5)通过对CLPS1体内抗氧化能力研究,建立D-半乳糖诱导的小鼠衰老模型,实验结果表明,CLPS1具有显著提高小鼠血清、肝组织、脑及皮肤组织的谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)及过氧化氢酶(CAT)的活性,同时减少各组织中的丙二醛MDA含量。(6)CLPS1浓度为400mg/kg时,模型小鼠中黑色素瘤转移灶减少约37.7%,CLPS1剂量为400μg/mL不会引起细胞毒性,CLPS1浓度为200μg/mL和40Oμg/mL对B16F10细胞迁移具有较强抑制作用,CLPS1可以显著减少由β1整合素依赖形成的粘附斑,抑制粘着斑激酶和桩蛋白磷酸化,最终导致黑色素瘤细胞迁移能力的丧失。