大面积深度烧伤导致的皮肤广泛缺损,严重地威胁着伤员的生命安全。如何尽快地使烧伤创面愈合,是烧伤治疗中仍然没有解决的难题。实验室和临床研究表明自体移植培养的角朊细胞膜片是一种非常有前途的皮肤修复技术。只需要取患者邮票大小皮肤标本,通过培养可以得到能够覆盖成千上万倍大小的烧伤创面的角朊细胞膜片。然而,这一技术存在几个主要的缺点,限制了它的临床应用,这些缺点是角朊细胞膜片收缩性大、脆性大又极其菲薄,不宜临床操作,移植后耐磨性、弹性差,容易起水疱,而且需要培养3-4周后才能得到可以临床应用的细胞膜片,不能满足尽快覆盖创面的临床需求。因此,有必要缩短角朊细胞膜片的培养时间,降低其收缩性和脆性,提高其耐磨性和弹性。 角朊细胞和成纤维细胞是参与创伤修复的两种主要细胞,人成纤维细胞可以产生大量纤维和基质,可以促进角朊细胞的生长和增殖。因此,在培养表皮细胞膜片时加入适当比率的成纤维细胞有望改善角朊细胞膜片的耐磨性、弹性,还有可能缩短培养角朊细胞膜片所需时间。目前已经知道成纤维细胞可以通过旁分泌途径和细胞—基质途径调控角朊细胞的增殖,但这两种细胞之间的直接接触效应对角朊细胞增殖作用尚不清楚。因此,我们通过本试验研究人角朊细胞和人成纤维细胞直接接触效应对角朊细胞增殖的作用。 实验目的: 1.观察成纤维细胞与原代/传代角朊细胞直接接触共培养对原代/传代角朊细胞增殖的影响。 2.浅探人成纤维细胞和人角朊细胞直接接触信号促进角朊细胞增殖的机理。 材料和方法: 1.人角朊细胞分离、无血清培养与鉴定:先用dispase和胰酶从皮肤标中分离角朊细胞,用K-SFM培养,再以鼠抗人角蛋白单克隆抗体为一抗,用免疫荧光法鉴定。测角朊细胞生长曲线和细胞周期。 2.人成纤维细胞分离、培养与鉴定:先用dispase除去表皮,再用胶原酶消化或