论文部分内容阅读
目的:1.探讨独一味石油醚提取物(petroleum ether extract of Lamiophlomis rotate,PEELR)对Tca8113细胞株细胞活性及增殖能力的影响。2.探讨独一味石油醚提取物对Tca8113细胞株细胞克隆形成能力的影响。3.探讨独一味石油醚提取物对Tca8113细胞株细胞凋亡的影响。4.探讨独一味石油醚提取物对小鼠成纤维小包L929细胞株细胞毒性的影响。5.探讨独一味石油醚提取物对Tca8113细胞株细胞周期的影响。6.探讨独一味石油醚提取物对Tca8113细胞株细胞中BAX,Bcl-2与Casepase3的蛋白表达量的影响。方法:通过磺酰罗丹明B(Sulforhodamine B,SRB)比色法、生长能力观察、细胞克隆形成实验、Annexin V/PI双染检测细胞凋亡和流式细胞术来检测Tca8113细胞株的细胞生长能力、增殖活力及凋亡比例,设置独一味石油醚提取物(petroleum ether extract of Lamiophlomis rotate,PEELR)实验组、空白对照组,以博来霉素(bleomycin,BLM,10μg/mL)作为药物对照组,以小鼠成纤维细胞L929细胞株作为细胞对照组检测PEELR毒性。经Hoechst/PI双染法观察Tca8113细胞株细胞形态、细胞总数及凋亡、坏死细胞比例。经细胞周期检测分析细胞周期阻滞情况。蛋白免疫印迹法(Western blot)对Tca8113细胞中P53,BAX,Bcl-2与Casepase3蛋白表达量进行检测。结果:1.24 h SRB比色法和Tca8113细胞株生长曲线结果显示:24 h的IC50=66.388μg/mL,PEELR药物浓度与对Tca8113细胞的增殖抑制率呈正相关;低浓度PEELR(25μg/m L和50μg/mL)对Tca8113细胞的生长能力与空白对照组相比无明显差异(P>0.05);中浓度PEELR(100μg/mL)和高浓度PEELR药物(200μg/m L和400μg/m L)对Tca8113细胞株的长期增殖抑制作用与对照药物组BLM(10μg/m L)相比差异无统计学意义(P>0.05)2.细胞克隆形成实验表明:随着PEELR浓度的增大,Tca8113细胞株细胞的克隆形成率(即增殖能力)逐渐减小;不同浓度PEELR药物对Tca8113细胞株细胞均有显著的增殖抑制效果(P<0.01);中浓度PEELR(100μg/m L)和高浓度PEELR药物(200μg/m L)对Tca8113细胞株的克隆形成能力与对照药物组BLM(10μg/m L)相比差异无统计学意义(P>0.05)。3.Annexin V/PI双染细胞凋亡比例检测显示:PEELR可以诱导Tca8113细胞株细胞发生凋亡;PEELR浓度与诱导凋亡能力呈正相关;与BLM(10μg/m L)组相比,PEELR组(50μg/mL和100μg/mL)无显著差异(P>0.05);与空白对照组相比,PEELR组的Tca8113细胞系晚期凋亡和坏死发生率均有极其显著差异(P<0.01);与BLM(10μg/m L)组相比PEELR组的Tca8113细胞系晚期凋亡和坏死发生率均有显著差异(P<0.05)。而不同浓度PEELR组相比均无显著差异(P>0.05)。4.细胞毒性试验显示:24 h的IC50=294.119μg/mL;低、中浓度PEELR对L929细胞系的影响与空白对照组,药物对照组相比无明显差异(P>0.05);高浓度PEELR对L929细胞系有抑制作用,呈正相关。5.随着PEELR药物浓度的增加,同一视野范围内细胞总数呈负相关,而凋亡、坏死细胞比例呈正相关。PEELR组正常细胞无明显形态的变化,凋亡细胞可见细胞核皱缩,PEELR组凋亡细胞比率显著大于坏死细胞比率(P<0.01)。6.随着PEELR药物浓度的增大,其作用24 h的Tca8113细胞系细胞周期的SPF指数和PI增殖指数均减小。7.Western blt实验结果显示:BAX和Casepase-3的蛋白表达量随PEELR药物浓度增大而增大,Bcl-2的蛋白表达量随PEELR药物浓度增大而减小。PEELR各个药物组均可以降低Bcl-2/BAX表达比率,差异具有统计学意义(P<0.01);Bcl-2/BAX表达比率的大小与PEELR药物浓度呈负相关;高浓度PEELR(150μg/mL、200μg/mL)组的Bcl-2/BAX表达比率小于1。结论:PEELR对体外培养的人舌鳞癌细胞的增殖有较好的抑制效果,且无明显的细胞毒性。PEELR可能是通过内源性凋亡通路,以上调BAX和Casepase-3的蛋白表达量和下调Bcl-2的蛋白表达量来引起线粒体外膜通透性增加和诱导细胞色素c的释放从而发挥了抑制Tca8113细胞株增殖及诱导其发生凋亡的作用。