论文部分内容阅读
作者首次对采自我国南海鲈形目鱼类体内寄生的异尖科线虫幼虫进行了分子分类学鉴定,从410尾隶属于78种鱼体内共采集到2396条异尖科线虫幼虫(异尖属的除外),结合形态学分类方法和分子生物学方法对南海鱼类寄生线虫进行了调查研究。根据形态观察和参数测量对线虫幼虫进行初步分类,从每种类型中挑选出代表性样品,运用保守引物扩增单条虫体的rDNA内转录间隔区(ITS区),对PCR产物分别用限制性内切酶TaqI和RsaI进行酶切。结合PCR-RFLP技术,依据酶切片段长度的多态性,部分样品测定的序列及形态特征,得出的实验结果显示南海鲈形目鱼类寄生异尖科线虫幼虫(异尖属的除外)共有6种：Raphidascaris lophii, Hysterothylacium longilabrum, H zhoushanensis, H amoyense, H aduncum和宫脂属未定种Hysterothylacium sp. NH-2012。其中Hysterothylacium sp.NH-2012和R. lophii是优势种,2396个异尖科线虫幼虫样品中有1280个为Hysterothylacium sp.NH-2012,914条线虫为R. lophii,约占总数的53%和38%,在日本金线鱼Namipterus japonicus、蓝圆鲹Decapterus maruadsi、金枪鱼Thunnus alalunga、带鱼Trichiurus haumela、蝴蝶鱼Chaetodontidae butterflyfish、镶点石斑鱼Epinephelus amblycephalus、黄鲷Dentex tumifrons、线纹拟棘鲷Centroberyx lineatus、竹荚鱼Trachurus japonicus等78种所检鱼类体内均有发现,并报道了6种异尖线虫的形态特征及其rDNAITS序列,统计其在南海海鱼体内的感染情况。本实验还以简单异尖线虫Anisakis simplex为外群,将本研究获得的6种异尖线虫的7种序列以及从Genbank上筛选的15个代表性的ITS序列,通过MEGA5.0软件用最大似然法(ML)和最大简约法(MP)构建系统发育树,分析其亲缘关系。结果发现,系统树有两个大的分支,宫脂属和针蛔属各在一支。Ea3和Hysterothylacium fabri的亲缘关系相对比较近,但并没有聚类在一起。Sal和Hysterothylacium aduncum (HQ702732.1)聚类在一起。Pj1和Hysterothylacium longilabrum (JQ520159.1)聚类在一起。样品Pe52和Hysterothylacium amoyense (EU828749.1)聚类在一起。Dm23、A145和Hysterothylacium zhoushanensis (JX028280.1)、(JX028281.1)聚类在一起。Ta2和Raphidascaris lophii (JX974559.1)聚类在一起。系统发育分析再次验证了这些线虫样品的分类地位。本论文首次对南海鲈形目鱼类体内寄生异尖线虫幼虫的分子鉴定和系统发育进行详细地研究，还报道了南海鲈形目鱼类寄生异尖线虫的感染率和感染强度，为鱼类异尖线虫病的预防提供了参考依据。