目的：确立应用TNFRⅡ转基因结合TNFα局部应用杀伤喉鳞状细胞癌的各种条件和方法，为喉鳞癌的基因治疗开辟新途径。 方法： 1、从大肠杆菌中按试剂盒步骤提取质粒备用。 2、喉鳞癌裸鼠模型的建立选择Balb/c纯系裸鼠110只，鼠龄3-4周龄，体重12-18g，均为雌性，实验组于背部皮下注入2×106Hep-2细胞0.2ml。对照组注射PBS0.2ml。隔离室净化空气层流架中，恒温恒湿，灭菌处理的饲料和水，供自由食用。当肿瘤长至8-10mm时，用于实验。 3、活体转基因 3.1转染不同剂量TNFRⅡ观察在相同时间的表达水平，确定TNFRⅡ的较佳转染剂量：取瘤体最大直径为8-10mm的裸鼠25只，随机分为五组，对照组、1ug组、5ug组、12.5ug组、25ug组，每组5只，对照组注入空质粒100ul，(转染组以脂质体与DNA最佳比例2.5∶1注入不同剂量的TNFRⅡ)48h将实验鼠脱颈处死后，取出瘤组织部分放入4％甲醛中固定，常规石蜡包埋。部分放入70％的酒精中固定。 3.2以转染较佳剂量的TNFRⅡ转染后观察转染后不同时间的TNFRⅡ表达水平：将肿瘤长至8-10mm的裸鼠25只随机分为转染组和未转染组，每组各5只，转染组以脂质体与DNA最佳比例2.5∶1注入较佳剂量的TNFRⅡ后于24h、48h、72h、84h，将实验鼠脱颈处死后取出瘤组织，未转染组注入空质粒100μl，在较佳的转染时间将鼠处死取出瘤组织。4TNFα局部注射：将肿瘤长至10mm的裸鼠选择成瘤较好的45只随机分为转染组和未转染组，转染组又分为治疗组和对照组，治疗组每组9只。对照组生理盐水组(6只)：注入生理盐水100μl代替TNFα，治疗组低剂量组：注入TNFα500u/只，中剂量组：注入TNFα2000u/只，高剂量组：注入TNFα10000u/只，特高剂量组：注入TNFα25000u/只，未转染组空质粒组(3只)：注入空质粒100μl代替TNFRⅡ。空质粒及TNFRⅡ每48h注射，TNFα隔三日注射，各共12次，治疗期36天，治疗期间每三日测鼠重，量瘤体最大长径及最大垂直径，注入最后一次TNFα或生理盐水24h后将实验鼠脱颈处死。 结论：通过对活体裸鼠喉癌移植瘤模型，转染TNFRⅡ基因结合局部注射不同剂量的TNFα，各治疗组均有抑瘤效果，但TNFα500u抑瘤效果较弱，而TNFα25000u虽然抑瘤效果较强，但毒性较大，注入TNFα2000u和TNFα10000u的裸鼠抑瘤效果无明显差异，考虑到TNFα的毒性作用，选用较低剂量较合适，故注入5μgTNFRⅡ48后，注入TNFα2000u/只，能够达到较佳抑瘤效果。