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目的: 宫颈癌的发病机制至今尚不清楚，而high-risk human papillomavirus(HR-HPV)早期基因E6/E7的持续表达是引起宫颈癌的最主要原因之一。其中HPV16是最常见的高危型别，因此建立宫颈癌组织HPV16早期基因E6/E7相关转录本的检测方法，系统分析宫颈癌发生各时期HPV16早期基因E6和E7的相关转录模式以及整合基因和整合位点邻近的基因，并探讨其致癌作用。 方法: 1、收集63例HPV16阳性的宫颈肿瘤组织，包括8例低度上皮内瘤变(LSIL)组织样本、38例高度上皮内瘤变(HSIL)组织样本和17例宫颈癌组织样本，同时以HPV16阳性的人宫颈癌细胞Caski作为阳性对照，以正常宫颈组织作为阴性对照，用TRIzol法抽提并提纯（去DNA处理）全RNA; 2、利用含保守序列的RT引物将标本中的mRNA逆转录成5端含保守序列的cDNA，接着用HPV16 E6特异性引物(P6)、HPV16 E7特异性引物(P7)和保守序列引物(P0)分别进行PCR扩增，建立特异性扩增HPV16 E6和E7相关转录本的方法; 3、设计HPV16 E6和E7特异性探针，采用Southern Blotting的方法验证相关转录片段; 4、切胶回收PCR扩增的转录片段，并连接载体测序。通过BLAST比对分析宫颈癌组织HPV16早期基因E6、E7相关转录本的序列和整合的宿主序列，并绘制转录模式图。 结果: 1、本研究利用人乳头瘤病毒癌基因转录本扩增的方法，用两对引物HPV16 E6特异性引物(P6)、HPV16 E7特异性引物(P7)和保守序列(P0)分别对宫颈癌组织、正常宫颈组织（阴性对照）和HPV16阳性的宫颈癌细胞Caski（阳性对照）的cDNA以及宫颈癌组织的RNA（阴性对照）进行PCR扩增，宫颈癌组织和Caski细胞有扩增片段，正常组织和RNA都未见扩增片段。表明，HPV16早期基因E6和E7相关转录本特异性扩增的方法建立成功。 2、分析HPV16阳性的LSIL、HSIL及宫颈癌组织中E6转录片段发现在LSIL样本中，只有少量的E6转录本，常见的片段长度为250bp、500bp和1000bp，在HSIL样本中，转录片段数量和种类明显多于LSIL，主要的片段长度集中在250bp、650bp和1000bp以上的大片段，而在宫颈癌组织中，除转录片段的数量和种类增多以外，优势转录片段更加明显，主要集中在500bp和1000bp。E7基因的转录本情况与E6类似，LSIL组织中样本之间转录本数差异较大，没有特征性优势转录，而特征性转录在HSIL和宫颈癌组织中却比较明显，尤其是宫颈癌。常见的转录片段主要有400bp、500bp、750bp、1000bp和1050bp，这说明随着LSIL向宫颈癌发展优势转录模式逐渐清晰。 3、Southern Blotting进一步验证E6和E7转录片段，结果与电泳一致，并证实了HPV16 E6和E7转录模式在宫颈癌发生发展不同阶段中的变化。 4、经BLAST比对后共绘制六种HPV16 E6转录本，模式A、B、C、D和E中未见宿主基因片段，属于游离型转录模式，模式F含宿主基因片段，属于整合型转录模式。模式A中E6基因的3端有两种断裂位点，分别是nt442和nt468;模式A和模式B都只有E6一种序列;模式C和D的区别在于E5基因3端结尾的碱基位点，分别是nt4150和nt4233。在这六种转录模式中，除模式F以外，其他的均为首次发现。 5、经BLAST比对后共绘制五种HPV16 E7转录本。模式A和模式E属于游离型转录本，模式B、C和D属于整合型。模式A中E1基因的3端有四种断裂位点，分别在nt880、nt949、nt1054和nt1234;模式B中E1基因的3端有两种剪切位点，分别在nt880和nt1107。在这些转录模式中，除已经有报道的模式B和D以外，其他三种模式A、C和E是首次发现。 6、HPV16早期基因E6和E7的转录模式在不同癌变程度的宫颈组织中存在较大差异。 7、将全部转录模式中的宿主基因序列做BLASTn比对，发现除了21号染色体和X染色体以外，其他人类染色体都有发生整合。同一样本多条染色体整合的样本占27.5％，同一染色体多个位点整合的样本占35％，并且发生多重整合的比例在宫颈癌中远高于LSIL和HSIL组织。有关基因整合的脆性位点共发现22个，其中FRA13A发生整合的频率最高。统计各个整合基因的频率发现，基因AMICA1、DAPK1、EBAG9和PIBF1整合两次，基因MRPS31整合四次，而基因PRDX5整合六次，是整合频率最高的基因。分析整合位点及上下游的邻近基因，发现大部分基因与肿瘤发生密切相关。 结论: HPV癌基因转录模式的可变选择，病毒基因组整合以及由于基因整合而影响宿主细胞整合位点基因和邻近基因的生物学功能等因素共同导致宫颈癌的发生。