民以食为天,随着人民对生活质量要求的提高,食品的安全问题引起人们广泛关注,快捷、灵敏的免疫层析检测技术发展迅猛。目前,泰乐菌素、替米考星、氟苯尼考及PDE-5抑制剂的分析检测手段均以液相色谱法或液相色谱-串联质谱法为主,这类方法虽检测结果可靠,但耗时长,前处理繁琐且需要专业的技术人员操作,无法满足现场样品的筛选要求。时间分辨荧光免疫层析检测法以操作简单耗时短、灵敏准确的优点,已成为近年来的研究热点。本论文以保健食品中PDE-5抑制剂（西地那非及他达那非类）非法添加物及动物源性食品中泰乐菌素、替米考星、氟苯尼考三种限量兽药为对象,研究开发了时间分辨荧光免疫层析检测（Time-resolved fluorescence immunochromatographic assay,TRFICA）方法及产品,获得了以下主要研究结果:（1）他达那非单克隆抗体制备与评价。基于他达那非类药物分子结构特点,计合成了具有马来酸不饱和手臂的他达那非半抗原HMA,采用活泼酯法偶联载体蛋白（KLH和OVA）作为完全抗原,通过免疫BALB/c小鼠与杂交瘤细胞融合与亚克隆技术制备出他达那非的单克隆抗体。通过ic ELISA初步评价了抗体对他达那非识别的灵敏度与特异性:在500 ng/m L同源包被浓度下,针对他达那非、氨基他达那非和去甲基他达那非的IC50分别达到了3.85 ng/m L、5.01 ng/m L和4.39 ng/m L。该抗体与西地那非类等功能类似物无明显交叉反应,分析性能良好,可用于进一步开发相关快速检测产品。（2）西地那非类与他达那非类药物同时检测TRFICA方法的建立。基于上述单克隆抗体,研发了西地那非类与他达那非类药物的双检测线（Test line,T线）模式的TRFICA方法。在抗体用量、T与C线（Control line,C线）及包被原浓度等优化条件下,该方法对9种西地那非类药物的IC50为2.49～5.88 ng/m L,检测限（LOD）为0.08～1.66 ng/m L,检测范围为0.24～71.64 ng/m L,可视化检测阈值（cut-off值）为31.25～250 ng/m L;对3种他达那非类药物的IC50为2.15～2.78 ng/m L,LOD为0.59～1.85ng/m L,检测范围为0.68～10.71 ng/m L,cut-off值为50～62.50 ng/m L。稳定性实验表明该TRFICA产品可在4℃稳定保存6个月以上,所需检测时间不超过13 min,两条T线之间无明显交叉干扰。保健酒、口服液和药丸样品中那非类药物的添加回收率在80.0%～125.8%之间,变异系数小于15%,准确度良好,适用于实际样品中他达那非与西地那非类PDE-5抑制剂的快速检测。（3）牛奶中泰乐菌素与替米考星同时检测TRFICA方法的建立。基于自制单克隆抗体,研发了泰乐菌素与替米考星同时检测的TRFICA方法。在抗体用量、T与C线（Control line,C线）及包被原浓度等优化条件下,该方法在牛奶基质中检测性能如下:（1）针对泰乐菌素,该方法IC50为4.06 ng/m L,线性范围为2.35～7.05 ng/m L,LOD为1.72 ng/m L,cut-off值为31.25 ng/m L;（2）针对替米考星,该方法IC50为3.74 ng/m L,线性范围为1.87～7.47 ng/m L,LOD为1.39 ng/m L,cut-off值为62.50 ng/m L。稳定性实验表明该TRFICA产品可在4℃稳定能保存6个月以上,所需检测时间不超过13min,与泰乐菌素和替米考星的其它结构功能类似物无明显交叉反应。牛奶样品中添加回收率在80.6%～124.5%之间,变异系数小于15%,准确度良好,可用于牛奶样品中泰乐菌素与替米考星的同时检测。（4）氟苯尼考TRFICA检测方法的建立。基于自制单克隆抗体,研发了检测氟苯尼考的TRFICA方法。在抗体用量、T与C线（Control line,C线）及包被原浓度等优化条件下,该方法在牛奶基质中灵敏度IC50为1.89 ng/m L,线性范围为0.42～8.40ng/m L,LOD为0.23 ng/m L,cut-off值为62.50 ng/m L;在鸡蛋基质中灵敏度IC50为2.86 ng/m L,线性范围为0.83～9.83 ng/m L,LOD为0.48 ng/m L,cut-off值为31.25ng/m L。稳定性实验表明该TRFICA产品可在4℃稳定能保存6个月以上,检测时间不超过13 min,与其结构功能类似物无明显交叉。牛奶样品中添加回收率在104.7%～112.3%之间,鸡蛋样品中添加回收率在95.3%～116.4%之间,变异系数小于15%,准确度良好,可用于现场牛奶样品中氟苯尼考筛查检测。