目的探讨丝素-壳聚糖(silk fibroin-chitosan, SFCS)为支架,接种颌下腺细胞后,于SD大鼠体内构建组织工程化颌下腺的可行性及生物学特征。方法取1-3dSD大鼠颌下腺,原代培养,传代,将第二代细胞标记5-BrdU,制备成密度为5×106/ml的颌下腺细胞悬液。将其接种于5mm×5mm×5mm的丝素.壳聚糖支架上,体外培养1w。选取8w龄的SD大鼠36只,随机分成实验组和对照组,每组18只。实验组将细胞-支架复合体植入鼠背部皮下；对照组将单纯的SFCS支架植入鼠背部皮下。植入术后3、7、14d每组随机处死6只SD大鼠,取材,大体观察各组局部组织及全身变化。植入物石蜡包埋,组织学切片观察丝素.壳聚糖中颌下腺细胞的生长状况。BrdU免疫组织化学检测细胞来源。CK8免疫组织化学检测颌下腺细胞增殖、生长情况。扫描电子显微镜观察颌下腺细胞与丝素-壳聚糖支架复合生长的情况。应用图像分析系统测定不同时期实验组CK8染色阳性细胞数,采用SPSS for windows 13.0统计分析软件对结果进行方差分析,检验水准α=0.05,P<0.05有统计学意义。结果1、大体观察实验组术后各时间点植入物表面光滑、平整,有被膜覆盖,周围组织炎症反应较轻,随着时间延长,表面有血管长入,形状始终与支架形状一致,对照组可见大量纤维结缔组织包裹材料,聚合物支架降解较实验组明显。2、组织学观察实验组细胞.支架复合物植入初期边缘出现炎症反应,中心区SFCS支架排列规整,颌下腺细胞数目较少,散在于SFCS支架中,分布均匀,无细胞外基质分泌。随着培养时间的延长,炎症反应逐渐减轻,颌下腺细胞数目逐渐增多,细胞或吸附于材料表面,或分散在支架内,聚集成集落,呈岛状排列,分泌的粉染的细胞外基质。3、免疫组织化学观察各时间点BrdU免疫组织化学染色均存在阳性细胞,CK8免疫组织化学染色,实验组植入术后3d时阳性细胞平均数为(29.53±9.37)/个,7d时阳性细胞平均数为(67.70±13.39)/个,14d时阳性细胞平均数为(139.07±47.27)/个,比较三组数据具有统计学意义(P<0.05),即随着时间的延长,颌下腺细胞数目增多。对照组术后各时间点植入物中均未观察到到CK8阳性与BrdU阳性细胞。4、扫描电子显微镜观察SFCS支架呈网状结构,植入初期颌下腺细胞成圆形,表面光滑,突起较少,散在的粘附于SFCS支架表面或网孔内。随着时间的延长,颌下腺细胞表面凹凸不平,形成颗粒状物,颗粒数目不等,细胞数目增多,粘附于材料表面,并伸出突起,细胞间相互接触、联系,甚至多个细胞聚集形成腺管样的结构。结论本实验应用SFCS作为支架,接种颌下腺细胞后,在体内构初步建出了具有生命活性的组织工程化颌下腺,为进一步组织工程化颌下腺的研究奠定了理论基础。