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背景:呼吸道合胞病毒(RSV)是儿科常见的呼吸道病原之一,属副黏病毒科肺炎属,为多形、外有蛋白包裹的核内RNA病毒,表面主要有两类功能蛋白:G蛋白和F蛋白,其中G蛋白主要介导吸附,促进Th2型炎症反应；而F蛋白主要介导胞膜融合及传入,引起Th1型炎症反应。目前普遍认为RSV感染所造成的免疫异常表现为Th1／Th2细胞功能和比例失衡,表现为Th1细胞及其分泌的因子不足,Th2细胞数量增多和功能亢进。Th1细胞主要分泌干扰素-γ(IFN-γ)、白介素2(IL-2),肿瘤坏死因子(TNF-β)等,介导细胞免疫；Th2细胞主要分泌IL-4、IL-5、IL-9、IL-10和IL-2等细胞因子,介导体液免疫。IL-4是Th2细胞生成的必需细胞因子。IFN-γ有利于Th1分化而抑制Th2细胞分化。有杀伤细胞内感染,促进MHC抗原表达,增加抗原的提呈、促进抗原被识别,诱导B细胞产生同种异型抗体等作用,同时还具有抗病毒活性。RSV感染呈全球性分布,具有显著的季节性,多流行于冬春两季。主要表现为毛细支气管炎和肺炎,严重时可引起梗阻性肺气肿,甚至可致呼吸衰竭、心力衰竭等。RSV感染还可引起哮喘等其他呼吸系统疾病的发生和发作。T-bet及GATA-3是决定CD4+的初始Th(Th0)细胞的分化方向的转录因子,起着Th1／Th2转换开关的作用,同时二者又起着交互抑制的作用。与Th1细胞分化有关的转录因子中T-bet是起主导作用。T-bet,是2000年发现的一种Th1细胞特异性转录因子,在Th1细胞分化中起关键作用。它通过激活IFN-γ的基因转录,诱导自身再表达,并通过细胞因子诱导Th0细胞向Th1细胞的分化。甚至在其他转录因子的协同作用下,T-bet可将分化中的Th2和已分化完全的Th2型细胞逆转为Th1型细胞,伴随大量产生的IFN-γ,抑制Th2类细胞因子(IL-4,IL-13,IL-5,IL-9,IL-10,IL-12,IL-6等)的产生。T-bet还可通过直接抑制Th2细胞特异性转录因子,进而抑制Th2细胞分化及促进Th1细胞分化。
研究目的:探讨毛细支气管炎在RSV感染急性期及恢复期,与TH1／TH2细胞分化相关的IFN-γ、IL-4以及转录因子T-bet在外周血单个核细胞(PBMC)中表达的变化。
研究方法:
1.于毛细支气管炎患儿发病急性期获取鼻咽分泌物,过滤除菌后接种于长满细胞培养瓶70％-80％处于生长对数期的Hep-2细胞,观察细胞是否出现合胞体。同时留取外周血2ml,静置留取血清检测RSV IgM抗体,根据这两方面检测结果确定毛支患儿是否RSV感染。
2.实验分组:①RSV感染后毛细支气管炎发病急性期组(符合临床毛支诊断标准)。②RSV感染后毛细支气管炎恢复期组。③实验对照组:取同期住院非感染性疾病患儿(主要为同期外科性疾病住院患儿)。取毛细支气管炎患儿血标本分离PBMC,分成2等份置于24孔板中培养,并以IL-21-2ug／L浓度[1、2]进行刺激,防止PBMC凋亡,培养6～24小时候收集细胞进行染色,进行流式细胞术检测IL-4及IFN-γ表达水平。另外,留取一份PBMC,提取RNA,进行RT-PCR,检测T-bet在以上各组的变化。
结果:
1.结合患儿临床表现,流行病学研究,病毒学的实验室检查,及细胞培养后合胞体形成,表明毛细支气管炎患儿系RSV感染后造成。
2.毛支患儿疾病急性期IL-4较正常非感染患儿增高,而IFN-γ则低于正常水平；恢复期患儿IL-4下降,IFN-γ有所升高。
3.T-bet转录因子在毛支患儿表达减少,而在实验对照组非感染性患儿表达相对偏高。
结论:RSV感染后毛细支气管炎患儿疾病急性期IL-4升高,IFN-γ较正常下降,恢复期IL-4下降,IFN-γ升高,说明毛支患儿体内细胞因子在RSV感染后有明显变化,存在以Th2优势的Th亚群失衡。支持目前普遍观点-IL-4为Th2型细胞因子,IFN-γ为Th1型细胞因子二者此消彼长,相互作用,IFN-γ介导的细胞免疫对RSV有清除作用。转录因子T-bet在毛细支气管炎患儿较非感染儿降低,说明与此病的发生发展有着密切联系。