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阿尔茨海默症（Alzheimer disease,AD）是一种以记忆和认知功能障碍为临床特征的神经退行性疾病,病理学特征包括神经细胞外Aβ沉积形成老年斑和神经细胞内tau蛋白过度磷酸化形成纤维缠结。研究发现,神经元丢失、突触功能异常和神经再生的降低也与AD的发生发展有关,神经细胞的缺失会破坏神经网络,造成学习记忆的障碍,促进神经再生可建立新的神经连接和神经网络,对神经功能损伤进行代偿和修复。神经再生受多条通路的调节,其中一条是Ca2+-Ca MK-CREB信号通路,通路中Ca M、Ca MKⅡ、Ca MKⅣ、CREB以及下游分子FGF2、Egr-1、Hu B、Hu C、Hu D和Frettin水平降低会减少神经再生。因此,正向调节Ca2+-Ca MK-CREB信号通路以及促进FGF2、Egr-1、Hu B、Hu C、Hu D和Frettin的表达能够促进神经再生,改善AD的学习记忆障碍。黄芩茎叶黄酮（Flavonoid from Scutellaria stem and leaves,SSF）是从唇形科植物黄芩地上部分提取的黄酮类化合物,已被证实具有抗菌、抗氧化、抗缺氧和改善记忆障碍等作用,但SSF对脑室注射Aβ25-35联合Al Cl3和RHTGF-β1（复合Aβ）所致拟AD大鼠是否能通过Ca2+-Ca MK-CREB信号通路来调控神经再生改善记忆障碍未见报道。本实验通过对大鼠脑室注射复合Aβ建立大鼠拟AD记忆障碍模型,探讨Ca2+-Ca MK-CREB信号通路介导的SSF对拟AD大鼠记忆障碍的影响及其作用机制,为进一步阐明SSF治疗AD的作用机制奠定实验基础。目的:探讨Ca2+-Ca MK-CREB信号通路介导的SSF对拟AD大鼠记忆障碍的影响及其作用机制。方法:60只健康成年SD雄性大鼠,其中50只脑室注射复合Aβ(第1天:RHTGF-β1,1μL;2～15天:Aβ25-35,4μL;2～6天:1%Al Cl3,3μL)建立拟AD模型,10只做相同手术但脑室注射生理盐水作为假手术组。术后45天利用Morris水迷宫进行记忆障碍模型筛选,模型成功大鼠随机分为模型组和三剂量药物组。药物组大鼠灌胃35mg/kg、70mg/kg和140mg/kg SSF30天,模型组和假手术组大鼠灌胃等体积的生理盐水。Morris水迷宫定向航行实验检测大鼠的记忆获得能力、空间探索实验检测大鼠的记忆保持能力、对侧实验检测大鼠的记忆再现能力;免疫组化检测大鼠海马回Neu N蛋白的表达;实时荧光定量PCR（q PCR）和Western blotting检测大鼠海马和皮层Ca M、Ca MKⅡ、Ca MKⅣ、p-CREB-Ser133、FGF2、Egr-1、Hu B/D、Hu D+Hu C和Frettin的m RNA和蛋白表达水平。所有数据用均数±标准差（Mean±SD）表示,利用SPSS 19.0统计学软件进行统计学分析,水迷宫数据采用one-way ANOVA和two-way ANOVA分析,其他数据均采用单因素方差分析,P＜0.05认为有统计学意义。结果:1拟AD大鼠记忆障碍模型筛选结果所有大鼠在4天的Morris水迷宫训练中找到平台的潜伏期都随着训练天数的增加逐渐缩短,根据水迷宫第四天手术组大鼠和假手术组大鼠找到平台的潜伏期计算模型成功率,本实验大鼠记忆障碍模型成功率为83.3%。2 SSF对拟AD大鼠记忆获得、保持和记忆再现能力的影响结果发现,在定向航行试验（1-2天）中,与假手术组相比,模型组大鼠找到平台的时间显著增加（P＜0.01）,而3剂量SSF不同程度地缩短AD模型大鼠找到平台的时间,说明三剂量SSF可以提高复合Aβ大鼠记忆获得能力。在空间探索实验中,与假手术组相比,模型组大鼠在目的象限的游泳时间显著减少（P＜0.01）,而三剂量SSF能显著增加大鼠在目的象限的游泳时间（P＜0.01）,说明三剂量SSF可以提高复合Aβ大鼠学习记忆保持能力,在对侧试验（4-6天）中,与假手术组相比,模型组大鼠找到平台的时间显著增加（P＜0.01）,而3剂量SSF不同程度地缩短AD模型大鼠找到平台的时间,说明三剂量SSF可以提高复合Aβ大鼠记忆再现能力。3 SSF对拟AD大鼠海马回中Neu N蛋白表达的影响免疫组化结果显示,假手术组大鼠海马回Neu N蛋白阳性表达明显较高,为棕黄色颗粒,着色大多部位在胞核,少数在胞浆。与假手术组相比,模型组大鼠海马回细胞Neu N阳性表达明显减少,且着色部位都在胞浆,极少数在胞核。然而三剂量SSF能不同程度增加复合Aβ所致大鼠海马回Neu N蛋白的表达水平,与模型组相比,35、70和140mg/kg剂量组大鼠海马回Neu N阳性表达依次增加,着色部位多数在胞浆,胞核着色依次增加,着色颜色依次加深,药物对Neu N蛋白阳性表达呈剂量依赖性关系。4 SSF对拟AD大鼠海马和皮层Ca M、Ca MKⅡ、Ca MKⅣ、p-CREB-Ser133、FGF2、Egr-1、Hu B、Hu C、Hu D和Frettinm RNA表达的影响。与假手术组相比,模型组大鼠海马和皮层中Ca MKⅡ、Ca MKⅣ、Egr-1的m RNA表达均明显减少（P＜0.05,P＜0.01）,海马中FGF2、Hu B、Hu C和Hu D的m RNA表达明显增加（P＜0.05,P＜0.01）,而皮层中FGF2、Hu B、Hu C和Hu D的m RNA无明显变化。然而,三个剂量SSF能促进复合Aβ所致大鼠海马、皮层中Ca MKⅡ、Ca MKⅣ、FGF2、Egr-1的m RNA表达（P＜0.05,P＜0.01）。5 SSF对拟AD大鼠海马和皮层Ca M、Ca MKⅡ、Ca MKⅣ、p-CREB-Ser133、FGF2、Egr-1、Hu B/D、Hu D+Hu C和Frettin的蛋白表达的影响。Western blotting法检测大鼠海马和皮层中Ca M、Ca MKⅡ、Ca MKⅣ、p-CREB-Ser133、FGF2、Egr-1、Hu B/D、Hu D+Hu C和Frettin蛋白表达水平。与假手术组相比,模型组大鼠海马和皮层中Ca M、Ca MKⅡ、Ca MKⅣ、p-CREB-Ser133、FGF2、Egr-1、Hu D+Hu C和Frettin蛋白表达明显降低（P＜0.05）,而Hu B/D蛋白含量明显升高（P＜0.01）。而三剂量能不同程度地增加大鼠海马和皮层中Ca M、Ca MKⅡ、Ca MKⅣ、p-CREB-Ser133、FGF2、Egr-1、Hu B/D、Hu D+Hu C和Frettin蛋白表达（P＜0.05,P＜0.01）。结论:1脑室注射Aβ25-35联合Al Cl3和RHTGF-β1可减少大鼠海马成熟神经细胞数量,降低拟AD大鼠神经再生和引起记忆障碍。2脑室注射Aβ25-35联合Al Cl3和RHTGF-β1可干扰大鼠脑内Ca2+-Ca MK-CREB信号通路,改变大鼠海马和皮层中Ca M、FGF2、Hu B、Hu C、Hu D和Frettin m RNA和蛋白的表达。3 SSF能不同程度地调节拟AD大鼠Ca M、Ca MKⅡ、Ca MKⅣ、p-CREB-Ser133、FGF2、Egr-1、Hu B、Hu C、Hu D m RNA表达水平,逆转Aβ25-35联合Al Cl3和RHTGF-β1所致海马皮层Ca M、Ca MKⅡ、Ca MKⅣ、p-CREB-Ser133、FGF2、Egr-1、Hu C+Hu D和Frettin蛋白表达的降低从而增加拟AD大鼠成熟神经细胞,促进神经再生和改善记忆障碍,且其作用在海马部位强于皮层。4 SSF对拟AD大鼠记忆障碍的改善作用源于其促进神经再生,而神经再生的增强源于SSF对Ca2+-Ca MK-CREB信号通路的正向调节。阐明SSF通过Ca2+-Ca MK-CREB信号通路介导改善拟AD大鼠记忆障碍的作用及其机制。