副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）,是一种普遍分布于水体、水生动物体内或水底沉积物中的一种革兰氏阴性嗜盐菌,是主要的食源性致病微生物之一,由它引起的食品安全事件逐年上升。近年来,由于临床治疗和渔业养殖中抗生素的大量使用,副溶血弧菌的耐药性日益严重,给水产养殖业带来了巨大的经济损失。水产养殖过程中,在弧菌病的治疗与预防中通常使用喹诺酮类抗生素,因此副溶血弧菌对喹诺酮类的耐药性也日益凸显。目前,国内外尚对副溶血弧菌耐药性流行病学的研究尚缺乏连续性的监测数据,且鲜见通过荧光定量PCR技术检测体外连续诱导过程中耐药基因表达量变化来研究副溶血弧菌对喹诺酮类抗生素的耐药机制。本研究对30株虾源副溶血弧菌进行药物敏感性试验,利用普通PCR的方法检测试验菌株的5种喹诺酮类耐药基因（包括gyr A,par C,gyr B,par E和nor M）携带情况,并对试验菌株进行环丙沙星和恩诺沙星耐药获得速率和消失速率的研究,比较耐药诱导前后菌株的MIC值。选取rec A基因作为内参基因,通过荧光定量PCR检测耐药诱导过程中gyr A、par C耐药基因m RNA表达量的变化,初步研究副溶血弧菌对喹诺酮类耐药的分子机制。本试验的主要结果为:1、对30株副溶血弧菌进行药物敏感性试验,结果表明,30株副溶血弧菌对磺胺类5种药物复方磺胺嘧啶,磺胺二甲嘧啶,磺胺间甲氧嘧啶,磺胺对甲氧嘧啶和复方新诺明的耐药性很强,耐药率最高可达100%,对氟苯尼考的敏感率最高,达83.33%,其次为氧氟沙星,敏感率达80%,对恩诺沙星,诺氟沙星,盐酸沙拉沙星,多西环素和新霉素的敏感率为40%～70%。出现多株多重耐药菌株,RAD/SD/SM2/SMM/SMD/SMZ为优势耐药谱,所含菌株占被检菌株总数的23.33%。耐药基因检测结果显示,除菌株2017135未检出nor M耐药基因以外,其余29株细菌均检出5种喹诺酮类耐药基因。检出的gyr A基因均未发生突变,其他耐药基因存在1～3个位点的突变,par E基因75位的突变可能与低水平耐药有关,多药外排泵基因nor M的99位可能是与环丙沙星耐药机制相关的突变点。2、根据喹诺酮类药物敏感性试验的测定结果,随机挑选出对恩诺沙星和环丙沙星耐药的3株菌株（2014018,2015056,2017130）,中介的3株菌株（2014135,2017129,2017137）和敏感的3株菌株（2013023,2013062,2017143）,对环丙沙星和恩诺沙星的耐药获得速率试验结果表明,副溶血弧菌经环丙沙星和恩诺沙星两种喹诺酮类抗生素诱导后,获得了很高的耐药性,其中菌株2013062对环丙沙星耐药获得速率最高,为256倍;菌株2014135、2017129,2017137对恩诺沙星耐药获得倍率也为256倍。在对两种喹诺酮类药物耐药消失速率研究中发现,菌株2017143对环丙沙星耐药消失倍率为4倍,2014018、2015056、2017130对环丙沙星耐药消失倍率为2倍,其余5株细菌对环丙沙星耐药性均未发生变化;菌株2014135、2015056、2017129及2017143对恩诺沙星的耐药性消失倍率均为2倍,其余菌株对恩诺沙星的耐药性未发生改变,结果表明副溶血弧菌在低浓度喹诺酮类药物中容易诱导出高耐药突变株,且耐药性在一定时间内不易消失。3、采用荧光定量PCR检测试验菌株（包括2013023,2013062,2017143,2014135,2017129,2917137,2014018,2015056,2017130）对环丙沙星和恩诺沙星耐药获得诱导过程中每一代菌株及环丙沙星和恩诺沙星耐药消失速率诱导的最后一代菌株的par C耐药基因和gyr A耐药基因m RNA表达量的变化。本试验选择的内参基因为rec A基因,使用SPSS软件对数据进行分析,Graphpad Prism 5.0软件作图,试验数据显示副溶血弧菌par C,gyr A基因的m RNA的表达量与耐药性成正比。对耐药获得速率中获得的每一代菌株及耐药消失速率的最后一代菌株采用荧光定量PCR检测gyr A基因和par C基因m RNA表达量,发现副溶血弧菌在喹诺酮类抗生素药物体外连续诱导过程中,gyr A基因和par C基因表达量整体呈上升的趋势,在对恩诺沙星和环丙沙星耐药消失速率诱导过程中发现,耐药组和中介组菌gyr A基因和par C基因的表达量在最后一代与原代相比均下调,有显著差异（P＜0.05）,敏感组菌株最后一代的表达量与原代相比有极显著差异（P＜0.01）,说明副溶血弧菌对喹诺酮类耐药性的增加与gyr A基因与par C基因表达量有关,但在诱导过程中表达量的变化并不是持续性的升高,可能是多种耐药机制共同作用或存在其他调节机制,有待进一步研究。