西番莲总黄酮提取分离及其抗炎、免疫调节活性研究

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目的:西番莲(Passiflora edulis)是西番莲科西番莲属的一种草质藤本植物,有研究表明西番莲发挥药效的主要成分是黄酮类化合物。本研究旨在提取西番莲中的总黄酮,并制订西番莲提取物的初步质量标准,以及考察提取物的抗炎和免疫调节作用,为西番莲提取物的开发利用奠定基础。方法:(1)经原料部位筛选、提取溶剂筛选和单因素试验,以乙醇浓度、水浴温度、提取时间和料液比为考察指标,采用正交试验优化提取工艺;(2)采用紫外分光光度法建立西番莲提取物中总黄酮含量的测定方法;采用薄层色谱法建立西番莲提取物中荭草素的鉴定方法;采用高效液相色谱法建立西番莲提取物中荭草素含量的检测方法;(3)以角叉菜胶致足肿胀建立BALB/c小鼠急性炎症模型,考察西番莲提取物(250,500和1000 mg/kg·bw)对小鼠足肿抑制率的影响,使用ELISA法检测各组小鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6和IL-10的水平含量变化,制作足趾病理切片进行组织病理学观察;以环磷酰胺诱导机体免疫抑制建立BALB/c小鼠免疫抑制模型,考察西番莲提取物(250,500和1000 mg/kg·bw)对小鼠脾脏和胸腺指数的影响,使用ELISA法检测各组小鼠血清中Ig A、Ig G、Ig M、IL-2、IL-10、TNF-α和IFN-γ的含量水平变化,制作脾脏和胸腺病理切片进行组织病理学观察。结果:(1)乙醇热回流法制备西番莲提取物的最佳提取工艺条件为:乙醇浓度80%、水浴温度90℃、提取时间60 min和料液比1:8 g/m L,最优提取工艺条件下荭草素从西番莲原料到西番莲提取物的转移率为56.06%-56.87%;(2)成功建立了紫外分光光度计法测定西番莲提取物中的总黄酮含量,成功建立了薄层色谱法鉴别西番莲提取物中的荭草素,成功建立了高效液相色谱法测定西番莲提取物中的荭草素含量;(3)成功建立角叉菜胶所致的BALB/c系小鼠足趾肿胀炎症模型,西番莲提取物显著降低足肿胀率和血清中TNF-α、IL-1β和IL-6的含量,以及显著提高血清中IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ的含量,具有明显体内抗炎效果。成功建立环磷酰胺诱导的小鼠免疫抑制模型,西番莲提取物极显著升高免疫抑制小鼠的胸腺指数和脾脏指数以及血清中Ig A、Ig G、Ig M、IL-2、IL-10、TNF-α和IFN-γ的含量,表现出明显的免疫调节作用。结论:(1)成功优选出西番莲提取物的最优提取工艺,该工艺稳定,重现性好;(2)分别成功建立了西番莲提取物中总黄酮的含量测定方法,荭草素的鉴别方法和含量测定方法,为制订西番莲提取物的质量标准提供了方法学依据;(3)西番莲提取物对角叉菜胶所致的足趾肿胀BALB/c系小鼠有明显的抗炎作用,对环磷酰胺诱导的免疫抑制BALB/c系小鼠有良好的免疫调节作用。
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