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研究目的随着化疗方案的不断改良和移植技术的成熟，目前白血病的完全缓解率得到进一步的提高，复发是目前治疗的难点，而微小残留病灶（MRD）是导致其复发的根源。CIK/DC-CIK细胞因具有非MHC限制性、高扩增率、体外高杀瘤活性及安全性好等优点，已在临床上得到广泛应用，但其临床疗效褒贬不一，我们认为过继免疫细胞向白血病MRD局部迁移的数量不足可能是影响其体内疗效的关键因素。因此，我们研究DC-CIK细胞在白血病宿主体内的的分布及DC-CIK是否表达Tim-3受体，探讨阻断DC-CIK细胞表面Tim-3受体是否影响其在病灶的分布，进而提高其体内杀瘤效应；以期寻找提高DC-CIK细胞治疗MRD临床疗效的方法。研究方法以患者外周血单个核细胞在体外培养2周获得CIK/DC-CIK细胞作为研究对象。流式细胞术检测CIK/DC-CIK细胞和正常人PBMCs表面免疫分子标记，鉴定CIK/DC-CIK细胞。用白血病细胞系K562建立皮下瘤裸鼠模型，多功能酶标仪与荧光显微镜观察CFSE标记的DC-CIK细胞在K562荷瘤裸鼠体内的分布，检测DC-CIK细胞在K562皮下瘤局灶及骨髓的分布情况。流式细胞术检测CIK/DC-CIK细胞及PBMCs表面Tim-3表达，比较三者Tim-3受体表达的差异；RT-PCR法进一步证实CIK/DC-CIK表达Tim-3。结合transwell法和荧光分光光度计检测Tim-3受体阻断前后DC-CIK细胞在体外跨肿瘤内皮细胞迁移能力的变化；多功能酶标仪与荧光显微镜检测Tim-3阻断前后DC-CIK细胞在K562荷瘤裸鼠体内向皮下瘤局灶及骨髓迁移数量的变化，并进一步观察阻断Tim-3前后对其体内杀瘤效应的影响。结果PBMCs中主要效应细胞亚群CD3+CD56+比例很低，只有4.31%，经过体外培养2周获得的细胞群中CD3+CD56+细胞亚群数量明显增多，其免疫表型如下：85.7%CD3+，22.7%CD3+CD56+，74.5%CD3+CD4－，76.5%CD8+，3.7%CD4+，31.6%CD3+CD8+，符合CIK细胞；与DC共培养获得DC-CIK细胞CD3+CD56+比例及CD3+CD8+/CD3+比例均升高。成功建立K562皮下瘤裸鼠模型，荧光显微镜观察到DC-CIK细胞在输入荷K562皮下瘤裸鼠体内后24小时在骨髓及皮下瘤局部的分布极少；多功能酶标仪定量检测各脏器组织内DC-CIK细胞分布水平从高到低依次如下：肾>肝>肠>脾>肺>瘤。流式细胞术和RT-PCR法均证实CIK细胞高表达Tim-3受体，其表达率为（83.26±5.69）%，且其中CD3+CD56+亚群表达最高（95.07±3.69）%；DC-CIK的Tim-3受体表达为（64.93±14.77）%，略低于CIK细胞，但CD3+CD56+亚群无明显差异；正常人PBMCs的Tim-3表达率极低（0.39±0.32）%，CD3+CD56+亚群Tim-3表达也只有（6.22±3.61）%。体外transwell迁移实验发现Tim-3阻断后DC-CIK细胞跨肿瘤内皮细胞1h迁移率由38.16%增加至52.66%，差异具有统计学意义（P<0.001）；体内实验证实阻断Tim-3受体后到达K562皮下瘤局部及骨髓的DC-CIK细胞较前增加（P<0.01）。体内实验还发现：每周一次DC-CIK细胞输注可以抑制裸鼠K562皮下瘤的生长，并且阻断Tim-3受体后的DC-CIK细胞输注可以延长荷瘤裸鼠的生存期（P<0.05）。结论DC-CIK细胞经尾静脉输入荷K562皮下瘤裸鼠体内后在皮下瘤局部及骨髓的分布量较少。阻断Tim-3受体后可以提高DC-CIK细胞在体外跨肿瘤内皮迁移率和促使其向肿瘤局部及骨髓迁移，并可以进一步延长荷瘤裸鼠的生存期。因此Tim-3有望成为增强DC-CIK及CIK细胞在过继免疫治疗中疗效的一个有效的新调控靶点，阻断Tim-3可望成为进一步清除MRD减少白血病复发的一种新策略。