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目的:前列腺癌(prostatic carcinoma,PCa)是老年男性常见疾病,其发病率位居西方国家男性恶性肿瘤第二位。我国发病率呈上升趋势。肿瘤的转移及肿瘤细胞无限增殖是导致前列腺癌患者死亡的主要原因。因此探讨调控肿瘤细胞迁移、侵袭及无限增殖的机理,并在此基础上寻找新的诊断和药物治疗的最佳作用靶点,将具有重要的理论意义和临床应用价值。 转录因子Sox2(Sex-determining region Y(SRY)-related HMG box)和肿瘤的生长、转移密切相关;其表达与前列腺癌分级呈正相关。在前列腺癌细胞中,Sox2如何调控细胞的生物学功能?其分子机制如何?截至目前为止,尚未见报道。 方法:本实验首先应用免疫细胞化学、半定量RT-PCR及western blot检测Sox2在不同前列腺癌细胞中的定位、mRNA及蛋白表达情况:其次,建立稳定下调及过表达Sox2的前列腺癌细胞系,通过MTT、克隆形成、BrdUrd掺入实验测定细胞增殖活力及DNA合成能力;流式细胞仪检测细胞周期;通过透射电镜、AnnexinV-FITC法检测Sox2对细胞凋亡的影响;利用western blot检测Sox2对细胞周期、凋亡相关蛋白表达的影响;最后,利用倒置显微镜观察法、划痕实验、Transwell迁移模型、Matrigel细胞侵袭及western blot等方法检测TGF-α及Sox2对前列腺癌细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的发生、迁移和侵袭能力的影响及相关基因的表达,同时检测TGF-α对Sox2表达的影响及介导此作用的信号通路。 结果:研究结果显示,Sox2广泛表达于前列腺癌细胞中,且胞浆及细胞核中均有表达;本研究成功构建了稳定下调及过表达Sox2的前列腺癌细胞系(DU145-Sox2-shRNA,PC-3-Sox2)。与对照组相比,DU145-Sox2-shRNA2细胞中Sox2 mRNA及蛋白表达水平显著下调(P<0.01),细胞增殖活力显著降低(P<0.05):细胞周期分布改变,G1期细胞数量增多,S期细胞数量减少;周期蛋白依赖性激酶抑制剂p27的表达增加,G1/S细胞周期调控蛋白Cyclin E的表达减少;同时,凋亡细胞显著增加,抗凋亡基因survivin mRNA和蛋白水平表达下调;而过表达Sox2的PC-3-Sox2细胞的相应结果与DU145-Sox2-shRNA细胞相反。TGF-α可诱导前列腺癌细胞由上皮转为间质细胞表型,而过表达Sox2的PC-3-Sox2细胞形态学变化不明显;但二者均伴随EMT marker分子E-cadherin、Vimentin及转录因子Slug表达的改变;并且TGF-α可通过EGFR/P13K/Akt信号通路调控Sox2表达;TGF-α不能诱导DU145-Sox2-shRNA2细胞EMT的发生。 结论:Sox2在前列腺癌细胞中广泛表达,且定位于胞浆和细胞核中。Sox2能够调控前列腺癌细胞的增殖能力,并与p27的表达呈负相关,与CyclinE的表达呈正相关:靶向抑制Sox2可通过降低Survivin表达而诱导前列腺癌细胞凋亡;TGF-α可诱导前列腺癌DU145细胞发生EMT,增强细胞的迁移和侵袭能力,这种作用可能是通过Sox2介导,进而通过其调控转录因子Slug的表达实现的。