日本乙型脑炎（Japanese encephalitis,JE）是由流行性乙型脑炎病毒引起的一种蚊媒性人畜共患传染病。NS1（Nonstructural protein 1）是该病毒的一种重要非结构蛋白,能够诱导机体产生具有保护作用的非中和活性的抗体,但其机制仍待解释。本研究通过原核表达系统表达JEV NS1蛋白,并将其免疫Balb/c小鼠,制备了单克隆抗体,通过方阵滴定确定了其中五株单克隆抗体针对不同的抗原表位,将单抗静脉注射日本乙型脑炎病毒感染的小白鼠,成功地筛选了一株具有乙脑治疗效果的单抗,标记为Anti-NS1-2B8。在此基础上用分段表达、定点突变等方法进行关键氨基酸鉴定,鉴定出了保护性抗原表位。最后,通过人工合成短多肽疫苗,再进行免疫保护攻毒实验,记录小鼠存活数目并评价短肽保护效果。本实验的主要内容如下:（1）JEV NS1蛋白单克隆抗体的制备用实验室保存的JEV NS1包涵体蛋白免疫四周龄Balb/c小鼠,免疫3-4次后检测抗体效价,选择满足融合条件的效价最高的小鼠在融合前第4天加强免疫一次。融合时,取免疫脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞（SP2/0）,用聚乙二醇（PEG）诱导融合。经过初筛选和多次亚克隆筛选,得到5株可以稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞,即1H9、2B8、3H1、4F12、4G11。单抗相加实验表明这五株单抗针对不同的抗原表位。（2）保护性抗体的筛选用绝对致死剂量的JEV P3毒株通过腹腔攻毒四周龄Balb/c小鼠,同时人为打开血脑屏障。在攻毒后第2-4天静脉注射制备的单克隆抗体,观察并记录小鼠的临床症状和存活数目,评价单抗的保护作用。结果显示,5株单抗中,2B8对致死剂量攻击具有保护作用,保护率达到80%,其余单抗无保护作用,保护率为0-10%。（3）保护性抗原表位的鉴定将NS1蛋白多次截短表达,通过western blot方法与单抗进行反应,鉴定出了保护性抗原表位,即225WPETHTLWGD234。再进一步通过定点突变的方法,发现了4个氨基酸对单抗的反应具有关键作用,即T228、H229、L231、W232。（4）保护性抗原表位的免疫保护性验证将保护性抗原表位片段的短肽串联三次合成,即PETHTLWGDPETHTLWGDPETHTLWGD,并将其偶联到载体蛋白（KLH）上以便更好刺激机体产生免疫反应。先用短肽免疫小鼠3-4次,然后以绝对致死剂量攻毒,记录死亡数目并分析,结果发现短肽对小鼠保护作用不明显（30%存活率）。分析原因可能是短肽分子量太小,对机体的免疫刺激太小。