研究背景：1971年，美国学者Folkman首先提出“肿瘤生长依赖血管生成”的著名学说，并由此提出了抑制肿瘤生长的新途径-抗血管生成(antiagiogensis)。随后许多学者经研究证实了肿瘤血管生成在实体瘤生长、发展、浸润及转移中的重要作用。大部分肿瘤的生长和转移均依赖于肿瘤的血管生成，肿瘤的生长可分为无血管期和血管期，肿瘤直径达1～2mm时，肿瘤分泌若干因子刺激血管形成，获得供血的肿瘤继续增大乃至转移。因此，近年来阻断肿瘤血管形成成为治疗肿瘤的新方法。肿瘤血管形成受许多因素的调节，其中，具有重要研究意义的是血管内皮细胞生长因子(Vascular endothelial groth factor，VEGF)。它能促进血管内皮细胞的增殖，同时，也能促进肿瘤细胞的转移。VEGF通过与血管内皮细胞上的特异性受体VEGF受体(VEGFR)结合发挥生物学效应。 VEGFR-1对VEGF发挥双重效应：在生理情况下，主要起负向调控VEGF的生物学作用，而在某些病理情况下VEGFR-1可以发挥正向调控VEGF的作用，其介导的信号转导在血管内皮细胞增生和血管通透性增加方面起了重要作用。因此，VEGF及其受体就成了肿瘤治疗的理想靶点。因此，对血管内皮细胞生长因子受体(VEGFR)的研究将具有重要意义。 目的：扩增目的基因VEGFR-1，构建pET-28a(+)/VEGFR-1重组体，在大肠杆菌中高效表达VEGFR-1蛋白，纯化VEGFR-1蛋白。 方法：以本实验室构建的克隆质粒为模板，设计合适引物，连接PCR扩增产物与pET-28a(+)质粒，把该质粒命名为pET-28a(+)/VEGFR-1，把该质粒移进DH5α感受态细胞，筛选阳性菌株，提取质粒，把质粒移进BL21感受态细胞，筛选阳性菌株，用IPTG诱导表达VEGFR-1蛋白质，超声破菌，经镍凝胶亲和层析纯化蛋白。 结果：成功构建pET-28a(+)/VEGFR-1重组体；SDS-PAGE电泳显示，融合蛋白的表达量显著，分子质量约17kD。 结论：在大肠杆菌中表达纯化后得到较高浓度的VEGFR-1融合蛋白，为研究蛋白结构功能和抗肿瘤药物打下基础。