研究背景和目的自体脂肪移植操作相对简单,移植组织安全且来源丰富,在整形修复重建方面应用越来越广泛,提高移植成活率和降低远期吸收率是提高该项诊疗技术疗效的重点。相关组织工程基础研究发现,诸多细胞、生长因子辅助脂肪移植,可明显提高脂肪的成活率,为临床应用提供了理论基础。但在制备过程中,因需添加外源性物质而增加了相关风险,限制了该项技术的临床应用。从生物安全性考虑,研究第一部分选择第三代血小板浓缩物浓缩生长因子CGF为研究对象,同富血小板纤维蛋白PRF对照研究,并复合应用于湿性细胞辅助脂肪移植技术(CAL技术),探讨联合脂肪组织移植后,对移植脂肪成活的影响,为其临床应用提供实验支持。第二部分通过CGF复合湿性CAL技术对颜面部凹陷畸形患者进行充填治疗,评估其临床效果和安全性,并与单纯脂肪移植组作比较。研究方法1.第一部分,利用新西兰大白兔自体静脉采血制备CGF,PRF,在构建动物模型上施行复合细胞辅助脂肪移植(CAL技术),并将其对移植脂肪成活的作用进行检验。选择健康新西兰雄性大白兔30只,每两只为一对,共60只耳朵,随机分成4组:CGF目的组、PRF对照组、CAG对照组、空白对照组;所有动物麻醉、消毒铺巾后,自兔背部肩胛区切取脂肪组织,制备移植脂肪、同时抽取静脉血液制备CGF,PRF;将制备移植物与脂肪组织按不同分组设计混合后,植入兔耳背部移植受区直径为3cm的圆形皮下腔隙内;术后大体观察移植脂肪成活情况,脂肪体积测量计算成活率/吸收率;术后2周、4周、12周作为观察点,分别处死5对共10只兔子,对标本HE染色并于显微镜下组织学观察;术后4周获得标本分别行油红O染色及组织学观察,行VEGF免疫组化染色检测表达情况,同时用CD31免疫组化染色进行标本血管密度的计算,统计学分析结果。2.第二部分,分析43例接受颜面部脂肪充填的门诊患者资料,其中22例患者接受单纯脂肪移植,21例患者接受加入自体CGF复合湿性CAL技术方式移植。术后彩超检查效果观察,统计两组患者的手术恢复情况、脂肪吸收率、术中及术后并发症发生情况等资料,并接受满意度调查。结果1.实验动物模型建立,所有实验动物全部存活。脂肪移植后2周、4周、12周留取标本。组织学观察,术后第2周,空白对照组脂肪细胞周围被纤维结缔组织包绕、伴有少量炎性细胞浸润,脂肪细胞周围可见散在少量微血管。CGF目的组、PRF对照组脂肪组织周围纤维结缔组织少,CAG对照组居中,可见新生血管形成,CGF目的组、PRF对照组血管化结构更加清晰;术后第4周,各组脂肪细胞周围纤维结缔组织较上周减少,脂肪细胞之间可见大量成熟的血管样结构生成,改建进一步完善,PRF对照组脂肪组织中可见脂肪空泡及纤维结缔组织较空白对照组少,CAG对照组居中,CGF目的组则观察到更多的正常脂肪细胞形态,脂肪空泡更少,脂肪组织更均匀;术后第12周,各组脂肪组织形态均匀,可见较多的新生血管生成,毛细血管位于正常脂肪组织中的脂肪细胞旁,结缔组织方面未见明显差异。2.术后第4周标本油红O染色显示各组移植脂肪组织均有红染,空白对照组和CAG对照组脂肪组织层的厚度较薄,脂肪细胞染色局部不均匀、脂滴大小不等;PRF对照组居中,脂滴分布较前两组均匀;CGF目的组脂肪组织层厚更明显,脂肪细胞染色更均匀、大小均一,细胞分布也更均匀,移植脂肪体积保存CGF目的组最高。术后第4周VEGF免疫组织化学染色显示,各组均可见棕黄色颗粒沉积,CGF目的组、PRF对照组染色深,数量多;CAG对照组、空白对照组阳性颗粒较少。3.术后第4周、8周、12周脂肪存活率目的组和对照组之间差异有显著性。CGF目的组(85.40±2.58)%,(63.75±5.76)%,(63.62±5.75)%;PRF对照组(83.27±2.85)%,(60.53±2.69)%,(54.91±3.01)%;CAG对照组(66.45±3.98)%,(51.45±3.26)%,(40.94±5.02)%;空白对照组(54.23±2.63)%,(41.60±2.42)%,(27.07±2.32)%。相同时期比较结果显示,CGF目的组和PRF对照组脂肪存活情况要优于其他两组,同时CGF目的组远期稳定性要优于PRF对照组,空白对照组脂肪存活率最低。CGF目的组较对照组脂肪组织改建速度快、新生血管早、再生脂肪成活高、自吸收少,远期稳定性高。4.血管断面密度计数,由高到低排列为:CGF目的组(65.61±1.88)个/高倍视野,PRF对照组(55.78±6.21)个/高倍视野,CAG对照组(42.89±2.51)个/高倍视野,空白对照组(25.81±2.87)个/高倍视野。CGF目的组同PRF对照组、CAG对照组、空白对照组间差异有显著性,CGF可以促进移植脂肪毛细血管新生,其促血管化作用优于对照组。5.临床试验两组患者脂肪移植充填术后,颜面部外观均有明显改善,未见感染、血肿、破溃、充填部位皮肤坏死、脂肪硬结、肉芽肿等严重的并发症。术后回访,部分患者早期伴有术区肿胀不适,多于术后2-3天自行缓解,术后一周回访肿胀已基本消退,大体观察移植术区柔软无明显硬结,轮廓圆润饱满。B超回声影像观察,CGF组较单纯脂肪颗粒移植组早期液化发生更少、移植脂肪铺展均匀。术后第1,3,6个月B超检查两组移植脂肪成活率差异有统计学意义,复合CGF组分别为(85.07±3.47)%,(79.84±3.34)%,(78.84±5.06)%,术后3mon与术后6mon比较差异无统计学意义(p=0.308)。单纯自体脂肪颗粒移植组分别为(67.53±5.33)%,(56.77±4.03)%,(51.04±4.75)%,术后3mon与术后6mon植入物成活情况比较t=5.82(p<0.001)。自体脂肪颗粒组术后一个月发现液化灶的机率为40.91%,6个月需再次或多次脂肪填充比例为54.55%;自体脂肪颗粒复合CGF组发现液化灶的机率为9.52%,再次或多次脂肪填充比例为19.05%。结果显示CGF复合脂肪颗粒注射移植后成活率高,远期移植物稳定性良好,二次手术的机率降低,患者对治疗的满意度高。结论1.通过对兔耳脂肪移植实验结果显示,脂肪组织在移植后会经过持续脂肪改建和血管新生的过程。由于受到多重因素以及CGF,PRF的作用的影响,不同组分中移植脂肪组织的改建、重建速度,以及新生血管速度均不相同。分析实验结果,CGF目的组较对照组脂肪组织改建速度快,新生血管早,脂肪细胞周围炎性细胞浸润轻。CGF混合脂肪移植,具有提高移植脂肪成活,减少脂肪吸收的作用,远期效果观察移植物稳定性优于PRF混合脂肪移植,可望成为辅助脂肪组织移植充填的有效手段。2.临床应用CGF复合湿性CAL技术对颜面部凹陷畸形的治疗,并将治疗效果同单纯离心浓缩的脂肪颗粒移植对比,结果提示利用该项技术进行的脂肪充填移植,术后移植脂肪组织成活率更高,发生液化的几率减少,术后移植物稳定性更好,由于组织存活良好降低了吸收率,可以有效避免或减少再次充填。充填后局部皮肤饱满圆润、与周围过度自然,未见明显不良反应,患者对该项治疗的满意度高。