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当前,由于可观的应用前景和相较游离态的巨大优势,固定化生物分子是极为令人感兴趣的领域。将生物分子固定到载体上涉及各种各样的机理,包括物理吸附、包埋、交联、亲和作用和共价结合,其中共价结合保证了生物分子的重复使用和稳定性,推动了其在连续化过程中的应用。不需预先活化生物分子,含有醛基、氰基或环氧基的许多载体可与生物分子表面的亲和基团如氨基、羟基和巯基在近中性pH的条件下反应。在此背景下,环氧基载体被证明非常适合于生物分子的共价固定。环氧基载体的制备主要有两种方法,即化学合成法和表面修饰法。本文通过两个步骤建立了丙烯酸系或酚醛系树脂的一种环氧基改性方法,并通过固定–半乳糖苷酶并检测其活性评价改性效果。第一,在乙醇溶液中,树脂上的羧基或酚羟基亲核取代溴丙烯中的溴原子,实现了对树脂的烯丙基修饰;第二,以过氧化氢为氧化剂,以醋酸为辅助剂,以Mn2+为催化剂,对树脂上的烯丙基进行环氧化,实现了对树脂的环氧基修饰。采用单因素实验优化连接和氧化反应的反应条件,结果表明,对于连接反应,溴丙烯用量等价于羧基/酚羟基表观量的3/4,连接时间12h,连接温度40℃;对于氧化反应,过氧化氢浓度1.0mol·L-1,醋酸浓度0.2mol·L-1,锰离子浓度10-3mol·L-1,氧化时间4.5h,氧化温度40℃。为进一步优化氧化条件,采用Box–Benknken设计研究过氧化氢、醋酸和锰离子影响氧化反应的交互效应。用傅里叶红外光谱仪表征原始、烯丙基修饰、环氧基修饰和酶固定的丙烯酸系或酚醛系树脂,红外光谱表明烯丙基和环氧基被成功引入树脂,且酶被成功固定于树脂上。环氧基改性的丙烯酸系或酚醛系树脂可用于固定生物分子如酶、抗原和抗体等,固定过程涉及两个机理:首先,配体与载体进行多位点物理吸附,高离子强度引起的疏水作用可以促进吸附平衡的建立;其次,载体上的环氧基与配体上的亲和基团如氨基、羟基和巯基进行多位点的化学作用,通过碳–氮、碳–氧或碳–硫单键将配体结合到载体上。因此,这种环氧基改性方法在生物催化、生物分离和生物分析等领域具有潜在的应用前景。