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目的:通过研究人NK/T细胞淋巴瘤细胞株SNK-6细胞及NK/T细胞淋巴瘤患者外周血与健康志愿者外周血中mi RNA-21表达量的差异,探究NK/T细胞淋巴瘤的临床特征及预后与mi RNA-21的相关性,以及mi RNA-21与SNK-6细胞株生长发育的关系及作用机制,以期为NK/T细胞淋巴瘤的发病机制、治疗策略提供理论依据及研究方向。方法:1研究对象:选择2013年~2015年间入河北医科大学第四医院血液内科就诊并可以收集到完善临床资料的NK/T细胞淋巴瘤患者外周血标本,以及采集于河北医科大学第四医院血液科健康志愿者的外周血标本作为对照组。人NK/T细胞淋巴瘤细胞株SNK-6细胞获赠于郑州大学第一附属医院张明智教授。2 SNK-6细胞的培养及传代:应用包含体积分数约为10%人AB型灭活血浆、1000u/ml的人重组白介素-2的RPMI1640培养基培养SNK-6细胞,并置于培养箱中,以恒温37℃、饱和湿度及5%CO2条件孵育,48h传代1次。于细胞对数生长期生长良好,悬浮成团时进行研究。3实验所需基因提取:应用mi RNA提取盒提取患者、健康志愿者血液标本及SNK-6细胞中的mi RNA,以及应用总RNA提取盒提取SNK-6细胞株中的总RNA,后将其反转录成为相应的c DNA置于-20℃冰箱中备用。4应用RT-PCR法检测mi RNA-21在外周血及SNK-6细胞中的表达水平。5应用瞬时转染技术将SNK-6细胞中的mi RNA-21进行定向封闭沉默。随机将处于同一对数生长期SNK-6细胞分为空白组、封闭同源性si RNA对照组和封闭mi RNA-21实验组,设立封闭同源性si RNA对照组,以排除转染试剂Endo FectionTM的细胞毒性对本实验影响。空白组正常培养,对照组细胞转入si RNA-同源性序列,实验组转入si RNA-21,同等条件转染48小时后提取三组细胞mi RNA,再次应用RT-PCR方法检测三组细胞中mi RNA-21表达高低,明确该条件下转染是否成功。5.1应用CCK-8方法观察转染成功封闭mi RNA-21后实验组生长趋势。取转染48小时后三组细胞,调整密度为1*105/ml,按100μl/孔接种于U型96孔板,每组设5个复孔,孵育48h后各加入10μl的CCK-8试剂,置于37℃、饱和湿度及5%CO2条件的培养箱中孵育,于第30min、1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h在酶标仪450nm条件下,测定各实验组的吸光度值(OD值),进行统计学分析。5.2应用RT-PCR检测沉默mi RNA-21前后细胞中PTEN、PI3K及AKT的m RNA表达水平的变化。取转染48小时后细胞,应用总RNA提取盒提取SNK-6细胞株中的总RNA,再次以RT-PCR方法检测PTEN、PI3K、AKT的m RNA表达量。6将入组患者外周血mi RNA-21表达量与其主要临床特征进行相关性分析。7将所有试验数据输入SPSS13.0统计软件,进行统计学分析,P<0.05,认为有统计学意义。人NK/T细胞淋巴瘤患者及健康志愿者外周血两组mi RNA-21基因量根据正态分布与否应用t检验或非参数检验进行统计学分析,对mi RNA-21的表达与NK/T细胞淋巴瘤患者临床特征进行应用χ2检验等频率分析。结果:1在外周血标本中,NK/T细胞淋巴瘤患者与健康志愿者组mi RNA-21表达量存在统计学差异(P=0.000),NK/T细胞淋巴瘤患者mi RNA-21表达量高于健康志愿者组,NK/T细胞淋巴瘤患者外周血中mi RNA-21存在异常高表达。2在人NK/T细胞淋巴瘤细胞株SNK-6细胞中,mi RNA-21的表达量与健康志愿者外周血对照组存在统计学差异(P=0.001),人NK/T细胞淋巴瘤细胞株SNK-6细胞中mi RNA-21的表达量较高,存在异常高表达。3在人NK/T细胞淋巴瘤细胞株SNK-6细胞中封闭mi RNA-21后,CCK-8结果显示空白组及封闭同源si RNA对照组吸光值均与封闭mi RNA-21实验组吸光值存在差异(P=0.001、P=0.003),实验组SNK-6细胞增殖活性明显低于其他两组。4在人NK/T细胞淋巴瘤细胞株SNK-6细胞中封闭mi RNA-21后应用RT-PCR方法检测到封闭mi RNA-21实验组细胞中PTEN的m RNA相对表达量较空白对照组升高,而PI3K、AKT的m RNA相对表达量较空白对照组降低,在NK/T细胞淋巴瘤中,mi RNA-21调控PTENPI3K/AKT通路的活性。5 mi RNA-21与NK/T细胞淋巴瘤临床特征的分析:mi RNA-21表达量高低与分期、骨髓受累与否、Ki-67、β2-MG、白蛋白水平存在统计学相关性。即随着mi RNA-21的表达越高,疾病分期越晚、骨髓受累几率增加、Ki-67阳性率越高、β2-MG越高、白蛋白水平越低。结论:1 NK/T细胞淋巴瘤患者外周血及人NK/T细胞型淋巴瘤细胞SNK-6细胞中mi RNA-21表达量存在异常升高。2 mi RNA-21的表达与NK/T细胞淋巴瘤细胞增殖相关。3 mi RNA-21通过对靶基因PTEN的调控,从而影响PI3K/AKT通路,参与到NK/T细胞淋巴瘤发生发展之中。4 mi RNA-21与NK/T细胞淋巴瘤的疾病分期、骨髓浸润、Ki-67阳性率、β2-MG、白蛋白等预后因素具有相关性。