枣疯病相关植原体田间寄主及症状形成效应因子的鉴定

来源 :山东农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xiaozhui221
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植原体是危害农作物、观赏性植物等的重要病原。枣疯病相关植原体是植原体16S rV-B亚组的重要成员,能够侵染枣树、刺槐和丝棉木等多种植物。枣树是山东省重要的经济作物,枣疯病严重影响枣业的安全生产。目前枣疯病相关植原体的潜在寄主和症状形成的机制还不清楚。本论文分析了枣疯病相关植原体的潜在寄主,预测并分析了枣疯病相关植原体的潜在效应因子在枣疯病丛枝和花变叶症状形成过程中作用,鉴定了两个潜在效应因子的寄主互作蛋白,主要结果如下:(1)分析了枣疯病相关植原体的田间寄主。利用植原体16SrRNA特异性引物对山东省烟台市和泰安市采集的8种不同寄主的15个植原体疑似样品进行PCR扩增。序列分析表明枣树、樱桃、臭椿、柿子树、荆条、小蓬草和榆树上扩增到的植原体16S rRNA序列相似度达到100%,与GenBank中枣疯植原体nky株系序列相似度较高,为99.07%;基于16SrRNA部分序列的系统进化和限制性片段长度多态性的iphyclassifier分析均表明本研究获得的枣疯病相关植原体分离物属于16SrV-B亚组。(2)明确JWB406是引起丛枝症状的效应因子。利用SignalP v3.0和TMHMM v2.0对枣疯病相关植原体基因组进行预测获得57个疑似分泌蛋白,其中28个为潜在效应因子。本氏烟中异源表达JWB406和JWB406转基因拟南芥均引起丛枝症状,表明JWB406与丛枝症状形成有关。免疫胶体金试验明确JWB406在寄主不同部位均有分布,利用激光共聚焦观察发现JWB406在细胞质和细胞核均有分布。筛选鉴定了拟南芥cDNA文库中与JWB406互作的寄主蛋白。共筛选到53个寄主蛋白。酵母双杂交试验表明,JWB406与SPL11和GATA3互作,而与II类CIN-TCPs中TCP13蛋白不互作,表明丛枝症状形成机制与已有报道不同。(3)证明JWB157是引起花变叶症状的效应因子。本氏烟异源表达和拟南芥转基因表达JWB157均引起植株花变叶症状。激光共聚焦观察发现JWB157在细胞质和细胞核均有分布。以JWB157为诱饵蛋白,筛选到92个与JWB157互作的寄主蛋白。
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