高血压病发生率高,在中国成人高血压病的发生率高达18%,目前我国有1.6亿高血压患者。自从20世纪40年代第一批抗高血压药物用于临床以来,已经有大批的抗高血压药物广泛应用于临床,对高血压防治做出了突出的贡献。目前治疗高血压的主要方法是依靠抗高血压药物。但由于高血压发病机制相当复杂,随着时间推移,使用单一药物治疗高血压渐渐开始显得力不从心。目前在临床使用的各类防治高血压的药物中,部分药物虽然能够控制血压,但仍旧不能有效改善高血压及其并发症的致死、致残现象。严峻的形势促使我们开展更深入研究。高血压病引发的并发症究其根本原因是靶器官损伤,损伤的程度不仅与血压水平关系密切,同时也存在多个相互独立的危险因素,很多研究证明,血压波动性升高普遍存在于高血压病人和高血压动物中,可以直接导致高血压病的靶器官损伤。鉴于高血压及其导致的并发症的严重后果,临床对于高血压的治疗非常重视。目前采用的单一药物治疗虽然简便、花费少,但它有一定局限性,有许多缺点如血压控制率低(仅45-50%的病人血压在单一药物治疗时得到控制)、不良反应多、有并发症的情况下限制了某些药物的应用等。所以临床医生主张个体化治疗,但由于其成本高,实施复杂等因素无法开展。随着我国经济发展,高血压患者呈逐年增长态势,防治高血压急需新手段。相对于实施个体化治疗,联合给药有着疗效确证使用面广,实施方便成本低,给药剂量小,副作用少,病人依从性好等优点,在众多高血压治疗方案中异军突起。协同作用作为联合给药的基础,能减少给药量,并且能扩大适用范围。那么两种或多种药物之间是否存在协同作用?在控制血压水平时存在的协同作用是否可以改善靶器官损伤?在何种比例下协同作用最明显?对于不同类型的高血压病人是否存在着相似的作用?本实验选用一线抗高血压药物,二氢吡啶类钙拮抗剂氨氯地平和血管紧张素受体拮抗剂坎地沙坦。研究这两种抗高血压药物之间是否存在协同作用及其影响因素,目的在于发现这两种药物最大的协同作用,使药物之间的协同作用成为继药物自身疗效之外的另一有效靶点。为联合用药治疗高血压病的作用机制研究提供理论基础。方法第一部分:16周龄雌性自发性高血压大鼠(SHR)220只,随机分为22组,每组10只,通过胃瘘管给予药物。氨氯地平单用组:氨氯地平原料药0.5,1.0,2.0,3.0 mg/kg;坎地沙坦单用组:坎地沙坦原料药1.0,2.0,3.0,4.0,6.0,7.0 mg/kg,联合用药组:氨氯地平+坎地沙坦原料药0.5+1.0,0.5+2.0,0.5+4.0,1.0+1.0,1.0+2.0,1.0+3.0,1.0+4.0,1.0+6.0,1.0+7.0,2.0+1.0,2.0+2.0,2.0+4.0 mg/kg,药物溶解于0.8%的羧甲基纤维素钠(CMC),经胃瘘管给予。血压记录从给药前1小时开始到给药后第6小时结束。记录SBP、DBP、HP、SBPV、DBPV、HPV后处死动物,每组动物均10只。以q值法评价急性给药后两药对SHR降压,稳定血压的协同作用。第二部分:采用两肾一夹(2KIC)高血压大鼠55只,雄性,做为肾血管性高血压模型,随机分为6组,每组9~10只。根据自发性高血压大鼠(SHR)急性实验结果的合适比例设定分组,分别给予溶剂对照、氨氯地平单用(1mg/kg)、坎地沙坦单用(2mg/kg)、氨氯地平和坎地沙坦联合用药(0.5+1,1+2和2+4 mg/kg),药物溶解于0.8%的羧甲基纤维素钠(CMC)经胃瘘管给予。血压记录从给药前1小时开始到给药后第6小时结束。记录SBP、DBP、HP、SBPV、DBPV、HPV后处死动物。以q值法评价急性给药后,氨氯地平与坎地沙坦对于肾血管性高血压动物模型降压的协同作用。第三部分:根据急性实验结果的合适比例,75只16周龄的雄性SHR随机分为6组:正常饮食对照、氨氯地平单用(1mg/kg/day)、坎地沙坦单用(2mg/kg/day)、氨氯地平和坎地沙坦联合用药(0.5+1,1+2和2+4 mg/kg/day),将药物按动物每日的食料量掺入大鼠标准饲料中,让动物自行食用,喂养五个月。对照组动物则食用不加药物的大鼠标准饲料。喂养结束,将动物动脉插管,清醒状态下记录6小时血流动力学指标。指标测定完成后,动物断头处死,取心脏、主动脉和肾脏进行大体形态学测定。计算左心室重和体重比(LVW/BW),心脏重和体重比(HW/BW),右肾重和体重比(RKW/BW),以及胸主动脉重和长度之比(AW/length)。结果1、对比氨氯地平和坎地沙坦单次使用的效果,氨氯地平降压效果较强,作用持久,坎地沙坦降压效果相对较弱,平稳降压时间较短。在自发性高血压大鼠急性联合给药的12个组中,随着给药量的增加,降压效果依次增强,但协同作用逐渐减弱。实验筛选的各个复方配比中,根据q检验结果,当氨氯地平与坎地沙坦剂量比为1:2时协同作用最大,其他各组协同作用随着剂量比例偏离1:2而逐渐减小。说明两药合用可以增强单药的降压效果,延长单药的降压时间,增强降压的作用。确证氨氯地平与坎地沙坦合用在降低血压方面存在着协同作用。2、根据q检验计算结果,两药联合使用对于降低自发性高血压大鼠(SHR)血压方面存在协同作用并且在复方比例为1:2时协同作用最好。将两种药物按照此比例联合,用于治疗两肾一夹(2K1C)肾血管性高血压大鼠,可以明显的降低血压,经q检验计算,氨氯地平与坎地沙坦合用治疗肾血管性的高血压大鼠时,同样存在协同作用。3、按照此比例将药物混入大鼠饲料,长期治疗后发现,两药半量合用组,合用组,两倍剂量合用组三个组均可以不同程度的降低血压以及血压波动性,合用组和两倍剂量组可逆转左心室肥厚及主动脉肥厚,并优于氨氯地平单用组。坎地沙坦单独使用虽然可以有效降压及减少靶器官损伤,但降低血压波动性方面弱于合用组。经q值计算两药以剂量比1:2合用长期治疗自发性高血压大鼠,在降低血压,降低血压波动性,改善反射功能,保护靶器官等方面存在协同作用。结论氨氯地平和坎地沙坦联合使用,单次口服给药能有效降低自发性高血压大鼠的血压,并且两药之间存在协同作用。当药物剂量比为1: 2时,协同作用最为明显。这种协同作用不仅能用于治疗自发性高血压大鼠(SHR),而且对肾血管性高血压大鼠(两肾一夹大鼠)的治疗同样有效。将两种药物按照复方比例1: 2长期治疗自发性高血压大鼠,能有效降低血压,降低血压波动性,保护靶器官,并存在协同作用。