双链RNA依赖的蛋白激酶PKR激酶结构域的结构解析及PBK活性位点的初步研究

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目的:RNA依赖性蛋白激酶PKR在先天免疫反应、细胞生长、细胞分化、信号传导和细胞凋亡中起着重要的作用。PKR的激活过程已经被研究了很多年,但是仍然没有统一的结论,为了进一步认识PKR的激活机制和亚基识别机制,我们进行了以下实验。方法:应用PET-28a载体表达了不同长度及突变位点的RNA依赖性蛋白激酶PKR,对其进行纯化,并用蛋白结晶的方法解析了突变形式的PKR激酶结构域PKR-KD的晶体结构(分辨率达到了2.9),通过超速离心实验,电荷表面分布图等方法解释PKR-KD的二聚体状态。结果:解析了突变形式的PKR激酶结构域PKR-KD的晶体结构(分辨率达到了2.9)。PKR-KD的整体结构与前边他人报道的是大体一致的,这个晶体结构呈现了一种典型的背靠背式二聚体形式和一种新诠释的面对面式二聚体形式,通过超速离心分析实验,电荷表面分布图以及PKR-KD和eIF2α复合物的结构模型都支持PKR-KD在溶液中以面对面这种二聚体形式存在,而且这种形式与其生物化学功能也更加相符。结论:实验结果提出了全新的PKR面对面式二聚体形式,为RNA依赖性蛋白激酶PKR的二聚体形成和激活机制提供了新的信息。
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