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第一部分研究高脂血症(HFD)对小鼠动静脉移植术后内皮细胞功能障碍及新生内膜形成的影响目的高脂血症加重冠状动脉旁路移植术后桥血管新生内膜的形成,其机制并不明确,本部分观察高脂血症(HFD)对小鼠动静脉移植术后内皮细胞功能障碍及新生内膜形成的影响。方法:取相同遗传背景的野生型(WT)C57/Bl6,雄性,4周龄小鼠,分为普通饮食组(Control,CTL)和高脂饮食组(High Fat diet,HFD),每组各20只,分别予普通饲料和60%高脂饲料喂养,每周记录其体重。喂养6个月后建立动静脉移植(AVG)模型。AVG术后28天,将受体小鼠麻醉,分离移植的动静脉血管,检查移植血管是否通畅,取下移植的动静脉,放入10%福尔马林溶液固定,石蜡包埋切片,行苏木精-伊红(HE)及免疫组化染色观察移植血管新生内膜的形成及内皮细胞功能,同时留取移植血管提取m RNA标本进行RT-PCR检测内皮细胞功能蛋白质VE-cadherin变化。结果:1.相对于普通饮食组,HFD明显增加小鼠体重并加重胰岛素抵抗;2.HE染色及免疫组化可见HFD明显增加小鼠移植血管新生内膜形成;3.HFD明显增加小鼠移植术后内皮细胞的损伤及炎症细胞的浸润。结论:HFD增加动静脉移植术后内皮细胞功能障碍及新生内膜形成。第二部分研究内质网应激在AVG术后内皮细胞功能障碍中的作用目的:内质网应激可诱导内皮细胞功能障碍,本部分研究内质网应激在AVG术后内皮细胞功能障碍中的作用方法:(1)检测HFD及对照组小鼠动静脉移植血管内质网应激标志蛋白及下游通路CHOP的变化(2)体外培养内皮细胞,给与OX-LDL处理细胞,并给与内质网应激保护剂4-PBA和TUDCA,观察内质网应激与内皮细胞功能障碍间的关系;(3)体外培养内皮细胞,先用sh RNA CHOP敲低内质网应激通路CHOP蛋白的表达,再给与OX-LDL处理细胞,观察CHOP在内质网应激诱导的内皮细胞功能障碍中的作用。结果:1.HFD明显增加小鼠动静脉移植血管内质网应激标志蛋白及下游通路CHOP的表达;2.体外细胞实验,OX-LDL明显增加内皮细胞功能障碍,而内质网应激保护剂可逆转OX-LDL导致的内皮细胞功能障碍;3.sh RNA CHOP敲低CHOP蛋白的表达可保护OX-LDL导致的内皮细胞功能障碍。结论:内质网应激参与动静脉移植术后内皮细胞功能障碍。第三部分研究内质网应激下游通路CHOP在动静脉移植术后新生内膜形成中的作用目的:观察敲除内质网应激下游通路CHOP的表达,能否减少动静脉移植术后新生内膜的形成方法:在CHOP-/-小鼠体内建立AVG模型,同时以共同遗传背景的CHOP+/+小鼠作为对照组,每组小鼠数目为10只。在AVG术后28天,5只小鼠留取AVG血管标本进行石蜡包埋切片,通过HE染色观察新生内膜形成情况,剩余5只提取RNA进行RT-PCR检测内皮细胞损伤标志物ICAM-1和功能蛋白VE-cadherin m RNA变化。结果:1.CHOP KO减少小鼠动静脉移植术后新生内膜的形成;2.CHOP KO减少动静脉移植术后内皮细胞损伤。结论:CHOP KO降低HFD所致的内皮细胞功能障碍,减少动静脉移植术后新生内膜的形成。