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近年来,基因治疗在遗传病、肿瘤治疗等方面有很好的前景,引起广泛关注。基因治疗面临的瓶颈问题是寻找一种高效、低毒的基因转染载体,将基因药物递送至特定的细胞中,并能稳定地维持其功能。目前,基因载体一般分为非病毒载体和病毒载体,而阳离子脂质体是非病毒载体中最具潜力的基因载体之一。本论文主要考察阳离子胆固醇衍生物的链接基团和链长对转染基因转染效率的影响,分别以N,N-二甲基乙二胺(DMAEA)或N,N-二甲基丙二胺(DMAPA)和胆固醇甲酰氯反应生成链接基团为酯基的(N,N-二甲基氨基乙基)-氨基甲酰基]胆固醇(DC-Chol)及多一个碳的同系物(N,N-二甲基氨基丙基)-氨基甲酰基]胆固醇(DMAPA-Chol);和CHEMS-NHS反应生成链接基团为琥珀酸基的N-(N’,N’-二甲基)乙基丁二酸单胆固醇酯单酰胺(DC-CHEMS)和多一个碳的N-(N’,N’-二甲基)丙基丁二酸单胆固醇酯单酰胺(DMAPA-CHEMS)。合成并纯化的产物经TLC、质谱和~1H-HMR谱分析,确证为目标产物。用薄膜分散法以阳离子胆固醇衍生物和大豆磷脂S100为膜材制备脂质体,同时对其进行理化性质和细胞毒性以及细胞内摄取、转染等的评价。DC-Chol、DMAPA-Chol、DC-CHEMS、DMAPA-CHEMS脂质体的数均粒径分别为115.8±9.3nm、118.0±15.3nm、120.0±14.2nm、124.1±12.8nm,表面电位分别为16.94±1.56mv、17.40±0.76mv、23.63±2.52mv、26.76±3.60mv。四种脂质体形态规整,几乎都呈圆形。当+/-电荷比在4:1以上时,四种脂质体均能将pDNA阻滞在上样孔处,并都有较强的保护pDNA的能力。四种脂质体的溶血率都在2%以下。MTT结果显示,当磷脂浓度在0.05mg/ml以下时,四种脂质体的细胞存活率都在80%以上,细胞毒性低。+/-电荷比在一定范围内,脂质体/F-ODN的细胞内荧光强度随着脂质体用量的增加而增加,而且在最低+/-=1:1时的摄取效果大于市售试剂Lipofectamine?2000。转染实验测定结果显示,四种脂质体的转染效果低下,明显低于市售试剂Lipofectamine?2000。普通的阳离子胆固醇脂质体中引入R8后,与pDNA的结合能力增加;细胞毒性相对增加,但增加的幅度不大,DC-CHEMS组的毒性几乎不变,存活率达100%,变化较大的是DC-Chol组,磷脂浓度在0.01mg/ml以下时,细胞的存活率约为80%;脂质体与R8孵育后能促进复合物入胞,DMAPA-Chol脂质体组促进效果最明显,平均荧光强度提高2.14倍,DC-Chol、DC-CHEMS、DMAPA-CHEMS脂质体组分别为1.50倍、1.21倍、1.43倍;但细胞的转染能力并没有达到预期的结果,在原来的基础上没有任何改善,只有少量的pDNA表达,与Lipofectamine?2000的转染效果相差很大。虽然加入R8后的复合物更能促进入胞,但目的基因在胞内的命运并没有改变,转染效率依然低下。以阳离子胆固醇衍生物和DOPE为膜材制备脂质体,同时对其进行理化性质和细胞水平的评价。DC-Chol、DMAPA-Chol、DC-CHEMS、DMAPA-CHEMS脂质体的数均粒径分别为173.3±6.4nm、179.9±8.1nm、147.6±5.9nm、149.1±5.1nm,表面电位分别为24.46±4.50mv、25.33±5.19mv、27.38±4.22mv、29.21±3.69mv;四种脂质体在+/-为8:1-1:8范围内,转染效果有个最强值,效果明显优于Lipofectamine?2000;在同一+/-时,发现加入R8的脂质体的转染效率反而没有不加R8的好,原因可用胞内分布的结果初步分析,DOPE脂质体介导的F-ODN主要位于细胞核,加入R8后主要位于细胞核周围,而S100脂质体介导的F-ODN在细胞核中含量最少。Western blot结果显示,DC-CHEMS和DMAPA-CHEMS组的蛋白条带比DC-Chol和DMAPA-Chol的浅,说明DC-CHEMS和DMAPA-CHEMS组表达的ASODN较多,转染效果较好,而同一中间部分不同链长的阳离子脂质体转染效率似乎没有一定规律,DC-Chol比DMAPA-Chol好,DMAPA-CHEMS比DC-CHEMS好。进一步说明了阳离子胆固醇衍生物中链长对转染效率的影响没有中间连接基团大,中间部分为琥珀酸基的阳离子胆固醇衍生物在作为基因载体材料方面的潜能更优于中间部分为酯基的阳离子胆固醇衍生物。