蝉拟青霉Paecilomyces cicadae是蝉花的无性型,含有多种氨基酸、蛋白质、多糖以及核苷类等活性物质,具有镇痛、降血糖、降血压、抗肿瘤等功效。N~6-（2-羟乙基）-腺苷[N~6-（2-hydroxyethyl）adenosine,HEA]是第一种生物来源的钙离子拮抗剂,同时也是肌力剂、放射保护剂和镇痛物质,为腺苷类衍生物。首次分离于虫草液体培养菌丝体,具有镇静、镇痛、降血压、抗肿瘤、保护肾脏、降低炎症反应等多种功效,其含量的高低是评价虫草质量的重要指标之一。HEA因具有效果显著的多种医疗功效而在医药和保健方面都具有较大的开发价值以及可观的市场前景,但目前而言,人们对HEA的研究尚处于前期探索阶段。本研究主要对蝉拟青霉5704s菌丝体中HEA提取工艺和产HEA的液体发酵培养条件进行工艺优化研究,主要取得以下结果:1.确定蝉拟青霉5704s菌丝体中HEA的HPLC检测方法:基于高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography,HPLC）,采用反相C18硅胶色谱柱测定蝉拟青霉5704s菌丝体中HEA的含量,经优化色谱条件后确定检测条件:流动相为A:甲醇,B:5 mmol/L乙酸铵溶液（含0.1%甲酸）,流动相梯度:0→1 min:5%A+95%B、1→8 min:5%A+95%B、8→12 min:50%A+50%B、12→13 min:5%A+95%B、13→15 min:5%A+95%B,检测波长为260 nm,流速为1.0 m L/min,柱温为25℃,进样量为10μL。测得样品中HEA含量为0.78mg/g。2.蝉拟青霉5704s菌丝体中HEA提取工艺的优化:在单因素试验基础上,采用响应面法考察液料比、水浴时间、水浴温度对HEA含量的影响并分析获得HEA的最佳理论提取工艺,经调整后的最佳HEA提取工艺为:超纯水为溶剂、液料比118:1、超声时间25 min、水浴时间3.8 h、水浴温度24℃,HEA含量理论值为0.836 mg/g,得到的HEA含量实际值为（0.836±0.030）mg/g,相较于优化前的HEA含量（0.781±0.002）mg/g提高了7%。3.分离纯化并鉴定蝉拟青霉5704s菌丝体中的HEA:采用大孔树脂、酸性氧化铝层析柱和半制备高效液相色谱仪（Semi Preparative High performance Li quid Chromatography,SP-HPLC）分离纯化提取液中HEA并获得单体,经电喷雾电离质谱（Electrospray Ionization Mass Spectrometry,ESI-MS）和核磁共振氢谱（Hydrogen Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy,HNMR）检测该单体为HEA,HPLC分析其纯度为99.32%。4.蝉拟青霉5704s菌丝体产HEA液体培养条件的优化:在单因素试验基础上,采用响应面法考察液体发酵培养条件中接种量、p H、和温度对HEA含量的影响并分析获得产HEA的最佳液体发酵培养条件,经调整后的产HEA的最佳理论液体发酵培养条件为:5 g/L的甘氨酸辅助HEA合成、接种量6%、p H 5.3、温度34℃,HEA含量理论值为1.921 mg/g,得到的HEA含量实际值为（1.965±0.140）mg/g,相较于优化前（0.797±0.019）mg/g提高了147%。综上所述,本文确定了蝉拟青霉5704s菌丝体中HEA的HPLC检测方法,获得了可有效提高蝉拟青霉5704s菌丝体中HEA提取效率的最佳提取工艺,和可显著提高HEA含量的最佳液体发酵培养条件,可为虫草真菌中HEA的工业化生产提供一定的理论依据。