具有优良特性的亲本材料是育种成败的关键,创制非转基因抗除草剂油菜新种质,通过常规育种方法选育抗性品种,是我国油菜田杂草防治的最为经济有效的途径,是实现我国油菜轻简化、机械化的重要技术环节。本研究通过不同浓度EMS诱变处理综合农艺性状优良的甘蓝型油菜“中双9号”,并通过苯磺隆对M2突变体库进行筛选,旨在创造出新的突变材料,丰富油菜种质资源;筛选苯磺隆抗性突变材料,为油菜功能组学研究及抗除草剂育种创制基础材料。研究获得主要结果如下:1、EMS诱变处理对M2代发芽率无明显影响,但显著抑制M1代发芽率,且随着EMS浓度的增大,抑制效果增强,当EMS浓度增大到一定水平时,发芽率陡降,二者呈非线性关系;M1代、M2代幼苗出土时间显著延长。说明EMS诱变处理不仅对M1代产生强烈的损伤,而且对M2代也有强烈的抑制作用。2、创建了包括子叶、叶片、花器、株型、角果等多器官/类型变异的突变体库,发现多种新的突变类型,如:多花瓣突变体、雌性不育、花瓣闭合、心叶白化等,为油菜遗传改良及基因功能研究提供了新的种质材料。3、通过对总计16,176个单株的M2代群体的子叶、叶片、花器、株型和角果等器官变异情况统计发现,0.4%、0.8%、1.0%和1.2%v/v的EMS溶液处理群体的表型变异率依次为11.26%、14.82%,27.19%和12.38%。本试验确定1.0%v/v的EMS溶液浸种12h是处理中双9号干种子的最适浓度。4、不同浓度处理具有器官特异性。低浓度诱变群体(0.4%EMS)出现了高浓度诱变群体(1.0%EMS)都未曾出现的多花瓣、花闭合等变异类型;高浓度处理(1.2%EMS)可能对根产生相对更多有利变异。此外,高浓度处理群体(1.0%EMS)发现大量角果粗短突变体。因此,改良油菜生殖器官应选用较低浓度EMS处理;改良油菜根系应选用较高浓度EMS处理。5、成功筛选到3株苯磺隆抗性突变体,分别记为抗1、抗4和抗5,突变率约为10-4。中9、抗1、抗4和抗5的ALS1、ALS2和ALS3克隆测序表明:①抗5ALS 第+544位C→T,导致所编码的Pro197→Ser(C544CT→TCT,以拟南芥ALS基因氨基酸序列为准),可能是抗5产生抗性的主要原因;②抗1和抗4ALS3第+535位C→T,导致所编码的Pro197→Ser(C535CT→TCT,以拟南芥ALS基因氨基酸序列为准),可能是抗1和抗4产生抗性的主要原因,抗5苯磺隆抗性比抗4高;③中9ALS3与数据库中的ALS3(Genbank:Z11526.1)相比,存在5个SNP位点,其中4个为同义突变,分别为+135(A→T)、+312(C→T)、+660(A→T)和+816(C→T),另一个为错义突变,+975(G→C),使编码的氨基酸 Glu→Asp(GAG975→GAC)。