宁夏地区牛结核病的分子流行病学调查

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目的:分离培养并鉴定牛源分枝杆菌;对分离获得的结核分枝杆菌复合群菌株进行基因多态性研究,从分子流行病学角度分析宁夏地区牛结核病流行特点;对非结核分枝杆菌亲缘关系进行研究,初步了解非结核分枝杆菌在本地奶牛中的流行情况。   方法:采集牛鼻拭子和牛咽拭子,对其进行处理,以罗氏培养法分离培养临床牛源分枝杆菌,并应用PCR方法做进一步鉴定;采用基于PCR的VNTR分型方法,对结核分枝杆菌复合群临床分离株进行多态性研究;采用ERIC方法对非结核分枝杆菌亲缘关系进行研究。   结果:   1.对2040份临床鼻拭子和咽拭子常规处理后,利用罗氏培养法对牛结核病病原菌进行分离培养,应用PCR方法对形态学及涂片染色呈阳性的细菌进行鉴定。共获得结核分枝杆菌复合群菌株(MTC)27株,非结核分枝杆菌34株。27株MTC中,25株为宁夏分离株(14株为牛分枝杆菌,11株为结核分枝杆菌),2株是新疆分离株(2株均为牛分枝杆菌)。   2.采用VNTR基因分型方法,对7株东北地区临床株、本实验室分离培养的25株宁夏地区临床株和2株新疆地区临床株进行基因多态性研究。在相似系数90%的水平上,得到26个基因型,其中包含8个簇(每2株一簇)和18个独特基因型。相似系数80%的水平上形成10个簇,3个独特基因型,最大一簇包含7株菌。   3.基因分型结果表明,存在养殖场的奶牛结核病流行情况,但没有场爆发性流行情况。宁夏地区分离的11株结核分枝杆菌中,1株为北京基因型;6株东北地区结核分枝杆菌中,3株为北京基因型。以上数据表明,宁夏和东北地区均存在北京基因型菌株的感染情况。由于尚未有关于牛源北京基因型菌株的报道,因此认为本实验中所研究的4株北京基因型株可能是由人传染给牛。某些不同养殖场的菌株间相似系数达到了90%以上,可能这些场间存在奶牛相互引进时造成结核病的传染。在相似系数80%的水平上,最大1簇包含的7株牛分枝杆菌,来自6个养殖场,因此认为该基因型牛分枝杆菌菌株可能是宁夏牛分枝杆菌流行株;国内外数据比对结果显示,宁夏分离株和国内、国际数据库的菌株相似度较低。   4.采用ERIC-PCR方法,对34株非结核分枝杆菌临床分离株的亲缘关系进行研究,通过聚类分析图可知在75%的分类水平上,将34株非结核分枝杆菌分成11组,9组成簇,2组独立,最多的2个簇各包含7株菌。对两个大簇菌株来源进行分析,簇1菌株分离自JT场、HN场、HG场;簇2菌株HS场、QL场、JT场。因此认为以上两簇所对应的菌可能为易感染奶牛的非结核分枝杆菌。
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