论文部分内容阅读
家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori Nuclear Polyhedmsis Virus,NPV)是昆虫病毒史上首先发现的,世界养蚕国家每年由NPV病引起的蚕茧损失是巨大的。BmNPV病毒基因组已经解析,家蚕抗BmNPV的分子标记以及mRNA差异显示分析也有报道,但是从蛋白质组水平研究工作尚未开展。
本研究以家蚕抗BmNPV品系、感性品系以及近等基因系为材料,通过二维电泳和质谱技术联用的方法,对家蚕中肠、血液、脂肪体进行抗BmNPV差异蛋白质组研究。同时,也研究了BmNPV蛋白质表达谱和蛋白鉴定。其结果如下:
1、在五龄起蚕第10小时和第18小时的血淋巴液中共分离出19种差异蛋白。其中在第10小时中找到了9种差异蛋白,抗性品系中表达量高于感性品系的蛋白有:富含半胱氨酸的分泌型酸性蛋白,Rab family GTPase,Mod(mdg4)-heS00531,ALY,仅在感性品系中发现的蛋白有phosphoribosyl pyrophosphate synthetase 和putative transposase yabusame-W。在第18小时中找到了5种差异蛋白,抗性品系中表达量高于感性品系的蛋白有:β-1,3-葡聚糖识别蛋白,酚氧化酶,而羟脯氨酸异构酶,溶酶体硫醇还原酶IP30前体1型是只在306和BC8两个品种中有,而在NB品种中没有明显表达。有意义的是在两个时间段里,氨基酰化酶只特异在抗性品系中表达。
2、在家蚕中肠中共分离出14种差异蛋白。其中在不添食BmNPV病毒的三个品系的表达图谱中共获得9种差异蛋白。抗性品系中特有的为:beta-glucosidase,protein disulfide isomerase,heat shock 70 kD protein cognate,tropomyosin isoform 1和serpin-2。而juvenile hormone diol kinase和calponin/transgelin是感性品系所特有的。在添食BmNPV病毒的三品系中获得了5种差异蛋白,其中抗性的表达量要高于感性品系的蛋白别为:similar to CG11267.PA,核糖体蛋白,bolA-like 3,脂肪酸结合蛋白(fatty acid binding protein)和翻译起始因子(translation initiation factor 5A)。
3、在家蚕脂肪体中共分离出20种差异蛋白。在不添食BmNPV病毒的三个品系中得出9种差异蛋白。在抗性品系中有的分别为:tropomyosin isoform 6,pol polyprotein,GA16543 gene product fromtranscript GA16543-RA,similar to bicaudal CG3644-PA,isoform A,Phosphoglycerate kinase(PGK)和arginine kinase。同时也发现在感性品系和近等基因系上存在的而在抗性品系NB上没有的蛋白点是heat shock cognate protein和glutathione S-transferase 2。另外在添食BmNPV病毒的三个品系中得出10种差异蛋白,其中9个是存在抗性品系中,分别为:reverse transcriptase,heat shock cognate protein,tropomyosin isoform 5,protein disulfide isomerase,ribosomal protein L21,Annexin IX-A,Protein of unknown function(DUF1676)和Actin3。,另外1种是感性品系和近等基因系BC8中发现的分别为:Troponin。
4、鉴定了BmNPV病毒(ODV)中的20种蛋白。分别是:Polyhedrin,BmNPV off133,Pk2,Bro-e,IE-0,VP80,BmNPV orf87,BmNPV orf94,DNA polymerase Helicase,GP41,VP39,IE1,Lef3,Lef2,P91,ODV-E56,P74,25k protein,Lef1和P74,有趣的是在凝胶图上获得了21个GP41的蛋白点,9个VP39的蛋白点。这些蛋白点在胶上无规则分布,有着不同的pI值和分子量。